豚鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)及體外轉(zhuǎn)染神經(jīng)營養(yǎng)因子-3的研究.pdf

1、中圖分類號＆2笪UDC610碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼!Q5塑密級公開豚鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)及體外轉(zhuǎn)染神經(jīng)營養(yǎng)因子一3的研究TheStudyofCulturedBoneMarrowMesenchymalStemCellsofGuineaPiganditsTransfectionwithNeurotrophicFactor3論文答辯日期作者姓名：學(xué)科專業(yè)：研究方向：學(xué)院(系、所)：指導(dǎo)教師：k噸矗Ⅳ張杰臨床醫(yī)學(xué)耳鼻咽喉頭頸外科學(xué)湘雅三醫(yī)院蔣明

2、副教授答辯委員會主席中南大學(xué)2014年5月仫r豚鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)及體外轉(zhuǎn)染神經(jīng)營養(yǎng)因子3的研究摘要目的：建立豚鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)的體外培養(yǎng)體系，體外脂質(zhì)體2000介導(dǎo)神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT_3)轉(zhuǎn)染BMSCs，為內(nèi)耳移植提供前期研究基礎(chǔ)。方法：(1)采用全骨髓貼壁法培養(yǎng)豚鼠BMSCs，傳代培養(yǎng)，取P3代BMSCs做生長曲線圖，在流式細(xì)胞儀上檢測BMSCs的表面標(biāo)志物CD29，CD90以及造血細(xì)胞表面標(biāo)志物CD45。f2

3、)按照不同質(zhì)粒脂質(zhì)體配比介導(dǎo)pEGFPN1一NT3轉(zhuǎn)染P3代BMSCs，轉(zhuǎn)染后48h后計算轉(zhuǎn)染效率，選擇最佳質(zhì)粒一脂質(zhì)體配比。(3)按照最佳質(zhì)粒一脂質(zhì)體配比將pEGFP—N1NT3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染P3代BMSCs，轉(zhuǎn)染后ld，3d，7d，14d，觀察其熒光表達(dá)情況。f4)轉(zhuǎn)染后48h的BMSCs提取蛋白，采用WesternBlot來驗證NT3蛋白表達(dá)。結(jié)果：(1)全骨髓貼壁法獲得細(xì)胞數(shù)量多，增殖快，通過傳代可以純化細(xì)胞。(2)生長曲線呈S型，基

4、本符合Logistic生長曲線。(3)流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞CD29和CD90陽性表達(dá)，CD45陰性表達(dá)，符合BMSCs特征。(4)不同質(zhì)粒脂質(zhì)體配比中，質(zhì)粒：脂質(zhì)體為499：129l時轉(zhuǎn)染率最高，是最佳質(zhì)粒一脂質(zhì)體配比。(5)轉(zhuǎn)染后48小時熒光表達(dá)較強(qiáng)，7d可見熒光表達(dá)，但較前明顯減弱，到14d基本未見明顯熒光表達(dá)。(6)WesternBlot驗證NT3基因成功表達(dá)。結(jié)論：(1)全骨髓貼壁法可以成功培養(yǎng)出增殖快，細(xì)胞純度高的BMSCs。f