慢病毒載體介導(dǎo)ZO-1基因感染iPS細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　有關(guān)心血管疾病的基礎(chǔ)研究中，證實(shí)閏盤相關(guān)基因ZO-1在心肌不同病理情況下有不同的改變，并與已明確同心肌電生理相關(guān)的Cx43分子存在相互作用。本實(shí)驗(yàn)欲構(gòu)建豬ZO-1基因的重組慢病毒表達(dá)載體，用其病毒液感染豬iPS細(xì)胞，以獲得攜帶該目的基因的豬iPS細(xì)胞。
　　方法:
　　分析Genbank的豬ZO-1mRNA序列，設(shè)計(jì)分別含有BamHⅠ、SalⅠ酶切位點(diǎn)的ZO-1基因上下游引物，PCR擴(kuò)增該基因，將其連接入載

2、體，構(gòu)建Lenti-EF1α-EGFP-TRE-ZO1重組慢病毒表達(dá)載體，挑選正確的克隆進(jìn)行測序鑒定。在此基礎(chǔ)上，使用慢病毒包裝質(zhì)粒pVSVG、質(zhì)粒delta8.91和Fugene轉(zhuǎn)染試劑一同轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，獲得病毒液，檢測病毒滴度，感染豬iPS細(xì)胞。
　　結(jié)果:
　　成功構(gòu)建了含有豬ZO-1基因的重組表達(dá)載體，通過酶切鑒定及測序鑒定證明結(jié)果與所設(shè)計(jì)序列相同。并成功包裝出慢病毒，獲得滴度為1.42*108IU/ml的病毒液