慢病毒載體介導血管生成素-1基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療腦梗死的實驗研究.pdf

1、Y1109206分類號tR743學校代碼：103鴕學號：2嘲02027福建醫(yī)科大學博士研究生畢業(yè)論文慢病毒載體介導血管生成素一l基匿修飾的骨髓閭一充質(zhì)干細胞移植治療腦梗死的實驗研究TreatmentofCerebralInfarctionbyTransplantationofAngiopoietinlGeneModifiedMesenehymalStemCellsMediatedbyLentiviralVector所在院(系)：研究生s

2、學科(專業(yè))：導師t研究起止日期：附一臨床學院藩桕齡神經(jīng)病學張志堅教授2005年2月至2007年2月二00七年三月慢病毒載體介導血管生成素1基因修飾的骨髓問充質(zhì)干細胞移植治療腦梗死的實驗研究中文摘要腦梗死是人類致死的三大疾病之一，其高致殘性給患者、家庭和社會帶來沉重的負擔。長期以來，人們認為中樞神經(jīng)損傷后引起神經(jīng)細胞不可逆的死亡，損傷的神經(jīng)元只能被膠質(zhì)細胞所填充，形成膠質(zhì)疤痕，從而喪失了神經(jīng)功能近年來，骨髓間充質(zhì)干細胞(mesenchy

3、malstemcells，MSCs)移植治療腦梗死已成為研究熱點。MSCs作為種子細胞，在體內(nèi)可囪多種急性損傷后的組織遷移并定位，在局部微環(huán)境的調(diào)控下分化為不同的組織細胞。MSCs為組織結(jié)構(gòu)和功能修復提供了細胞來源，且易通過血腦屏障，少有免疫排斥反應(yīng)，已成為腦缺血性疾病治療的理想靶細胞。血管生成素1(Angiopoietin1，Ang1)是一類重要的血管生長因子，特異性地作用于內(nèi)皮細胞，參與血管生成的調(diào)控過程，Ang1通過干預內(nèi)皮細胞、

4、平滑肌細胞和周細胞之間的相互作用促進血管生成和重塑，在缺血等病理狀態(tài)下可作為一種關(guān)鍵的血管生成調(diào)節(jié)劑。它可通過促進缺血組織周圍側(cè)支循環(huán)形成、穩(wěn)定血管、延緩血管退化；加強內(nèi)皮細胞間的緊密連結(jié)，維持血腦屏障的完整性；保護神經(jīng)元、抑制凋亡等多重作用機制，從而明顯增加缺血腦組織血流灌注，挽救半賠帶神經(jīng)元。AngI已成為缺血性腦血管病基因治療新的靶點。慢病毒載體具有可感染分裂細胞及非分裂細胞、轉(zhuǎn)移基因片段容量較大、目的基因表達時間長、不易誘發(fā)宿主

5、免疫反應(yīng)等優(yōu)點，已成為當前基因治療中載體研究的熱點。因此。我們設(shè)想通過慢病毒載體的介導，將Ang1基因轉(zhuǎn)移至MSCs中，并將基因修飾的MSCs通過靜脈移植至大腦中動脈栓塞模型大鼠中，利用MSCs可向急性損傷病灶趨化聚集的特點，期待MSCs能夠攜帶4ng1基因遷移至損傷部位，發(fā)揮A皿g1和MSCs的協(xié)同治療作用。本課題分為三部分第一部分：血管生成素I基因重組慢病毒載體質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定從Genbank獲得AngI基因序列，結(jié)合載體上的酶切位