HOXD8基因多態(tài)性與先天性髖脫位傳遞不平衡研究.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文HOXD8基因多態(tài)性與先天性髖脫位傳遞不平衡研究姓名：盧瑤申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：兒科學(xué)指導(dǎo)教師：麻宏偉20020401體檢及x 線檢查均符合單純型先天性髖脫位。收集1 0 1 例核心家系外周E D T A 抗凝血5 m l ，按常規(guī)酚／氯仿法提取基因組D N A 。2 ．P C R 擴增：選取H O X D 8 基因內(nèi)3 ’端非編碼區(qū)的二核苷酸重復(fù)序列多態(tài)性作為遺傳標記。反應(yīng)體系2 5 1 ．d ，循環(huán)條件：9

2、 4 。C預(yù)變性1 0 m i n ，經(jīng)9 4 ℃、5 5 ℃、7 2 ℃各4 0 s ，共3 5 個循環(huán)，7 2 ℃延伸7 r n i n 。3 ．等位基因分離檢測：P C R 產(chǎn)物于含7 m o l ／L 尿素的6 ％變性聚丙烯酰胺膠上作垂直電泳，恒定功率4 0 W ，電泳2 ．5 h ，銀染后在自動凝膠成像系統(tǒng)上成像。4 ．數(shù)據(jù)處理：先天性髖脫位核心家系的傳遞不平衡檢驗( T D T ) ，采用S A S 軟件中的F R E Q

3、程序進行分析，該軟件應(yīng)用核心家系雜合子型父母未傳遞給子代的等位基因作為對照，計算P 值，并進行F i s h e r 精確性檢驗，以檢測遺傳標記位點與假設(shè)的疾病位點之間是否存在傳遞不平衡。結(jié) 果1 ．H O X D 8 基因多態(tài)性分析：在1 0 1 個先天性髖脫位核心家系中檢測出1 6 個等位基因片段，命名為等位基因l —1 6 。2 ．傳遞不平衡檢驗：對于H O X D 8 等位基因4 而言，雜合子型父母向子代傳遞等位基因4 的數(shù)目為