先天性肛門(mén)直腸畸形相關(guān)基因篩選、表達(dá)及多態(tài)性研究.pdf

1、先天性肛門(mén)直腸畸形(anorectal malformations，ARMs)是小兒常見(jiàn)的消化道畸形，是世界衛(wèi)生組織常規(guī)監(jiān)測(cè)的先天畸形之一，占消化道畸形的1/4，發(fā)病率為1/5000～1/1500。術(shù)后有近1/3患兒合并不同程度的排便排尿功能障礙，嚴(yán)重影響患兒的生活質(zhì)量，該病是主要危害我國(guó)兒童健康的先天畸形之一。 先天性肛門(mén)直腸畸形的病因仍不清楚。目前認(rèn)為，肛門(mén)直腸畸形的發(fā)生是遺傳因素和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果。流行病學(xué)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

2、表明遺傳因素在其發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮重要作用。最近國(guó)外學(xué)者利用肛門(mén)直腸畸形動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，Shh基因、Gli2基因、Gli3基因、Hox基因、Fgf10基因、Bmp4基因、Wnt5a基因、Eph和ephrin基因的B亞類(lèi)、Sall基因在消化道末端發(fā)育中發(fā)揮重要作用。當(dāng)上述基因異常均可導(dǎo)致動(dòng)物出現(xiàn)肛門(mén)閉鎖、肛門(mén)開(kāi)口異位等畸形。 由于肛門(mén)直腸畸形發(fā)病機(jī)制和病理改變十分復(fù)雜，多伴發(fā)其他畸形，遺傳方式和外顯率尚不清楚，涉及的相關(guān)基因較多，且

3、可供研究的家系和標(biāo)本嚴(yán)重匱乏，因而對(duì)其致病基因的研究進(jìn)展緩慢，短時(shí)間內(nèi)難以有所突破。人類(lèi)先天性肛門(mén)直腸畸形基因水平的研究國(guó)內(nèi)外報(bào)道較少，至今尚無(wú)先天性肛門(mén)直腸畸形相關(guān)基因得到定位。因此從分子水平探索人類(lèi)先天性肛門(mén)直腸畸形的發(fā)病機(jī)制具有十分重要的意義。 基因芯片也稱(chēng)為基因微陣列，是指在有限的載體上加載大量基因信號(hào)，可以用有限的標(biāo)本，在短時(shí)間內(nèi)、條件幾乎一致的情況下，檢測(cè)大量基因的表達(dá)情況，從而提供全面可靠的基因表達(dá)譜。 應(yīng)

4、用基因表達(dá)譜芯片對(duì)正常兒及肛門(mén)直腸畸形患兒消化道末端進(jìn)行基因表達(dá)分析，篩選出差異表達(dá)基因。對(duì)差異表達(dá)較顯著的基因，擴(kuò)大樣本量，經(jīng)過(guò)RT-PCR驗(yàn)證可靠，并且利用醫(yī)學(xué)生物信息學(xué)分析。實(shí)驗(yàn)觀察所篩選的基因在大鼠胚胎中晚期消化道末端表達(dá)的時(shí)空性；并且應(yīng)用免疫組織化學(xué)、RT-PCR和蛋白印記研究篩選基因在人類(lèi)肛門(mén)直腸畸形的直腸末端的表達(dá)；在此基礎(chǔ)上應(yīng)用限制性片段多態(tài)性(restriction fragment length polymorphi