IGFBPrP1與硫代乙酰胺對(duì)小鼠肝組織的影響及其機(jī)制.pdf

1、研究背景:硫代乙酰胺(thioacetamide，TAA)誘導(dǎo)的肝纖維化模型在形態(tài)學(xué)和功能上均與人肝纖維化相似，成功率高不易逆轉(zhuǎn)，是一種經(jīng)典的肝纖維化模型[1,2]。導(dǎo)師劉立新等研究發(fā)現(xiàn)在肝纖維化和肝硬化患者的肝組織中胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1(insulin-likegrowth factor binding protein related protein1，IGFBPrP1)的表達(dá)較正常對(duì)照組顯著增強(qiáng)，與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(t

2、ransforming growth factor beta1，TGFβ1)的高表達(dá)成正相關(guān)關(guān)系[3]；在TAA誘導(dǎo)的肝纖維化中，抗IGFBPrP1抗體可減少細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)的沉積，減輕肝纖維化程度[4]；重組IGFBPrP1可使體外培養(yǎng)的肝星狀細(xì)胞(hepatic stellatecell，HSC)中ECM合成增加[5]。那么IGFBPrP1對(duì)肝組織會(huì)有什么樣的直接作用呢?其對(duì)肝組織的損傷程

3、度是否能達(dá)到TAA相似的效果呢?為闡明此問(wèn)題，設(shè)計(jì)了本課題。
　　 目的:通過(guò)對(duì)IGFBPrP1與TAA對(duì)小鼠肝組織影響的研究，明確IGFBPrP1在肝纖維化中的作用地位及其機(jī)制。
　　 方法:清潔級(jí)C57BL/6野生型小鼠，雄性，32只，隨機(jī)分為4組，每組8只：正常對(duì)照組：腹腔注射PBS0.3ml/只，每周3次；重組小鼠IGFBPrP1(rmIGFBPrP1)4周組：腹腔注射rmIGFBPrP10.015μg/g，每周

4、7次；TAA2周組：腹腔注射TAA200mg/kg，每周3次；TAA4周組：腹腔注射TAA200mg/kg，每周3次。行HE染色和苦味酸-天狼猩紅染色觀察小鼠肝組織病理學(xué)變化，免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)TGFβ1、Smad3、p-Smad2/3、Ⅲ型膠原(CollagenⅢ)的表達(dá)，Western blot檢測(cè)IGFBPrP1、TGFβ1、Smad3、p-Smad2/3、Ⅰ型膠原(CollagenⅠ)和纖維連接蛋白(FN)的表達(dá)，并對(duì)上述檢測(cè)

5、指標(biāo)做出相關(guān)性分析。數(shù)據(jù)采用SPSS11.5軟件統(tǒng)計(jì)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較方差齊性時(shí)用SNK-q檢驗(yàn)，方差不齊性時(shí)用Dunnett's T3檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有顯著性的界限。
　　 結(jié)果:
　　 HE染色和苦味酸-天狼猩紅染色：rmIGFBPrP14周組肝細(xì)胞廣泛脂肪變性，纖維組織增生；TAA2周組肝細(xì)胞變性、壞死，出

6、現(xiàn)纖維組織增生；TAA4周組病理改變較TAA2周組嚴(yán)重，可見(jiàn)大量纖維間隔生成。
　　 免疫組織化學(xué)染色：與正常對(duì)照組相比，rmIGFBPrP14周組、TAA2周組和TAA4周組TGFβ1、Smad3、p-Smad2/3、CollagenⅢ的表達(dá)明顯升高(3.67±0.42，4.59±0.34，6.99±0.24vs0.38±0.09，F(xiàn)=656.962，P＜0.01；1.10±0.19，3.18±0.19，3.94±0.21vs

7、0.25±0.09，F(xiàn)=766.935，P＜0.01；4.27±0.59，6.77±0.43，5.94±0.31 vs0.35±0.10，F(xiàn)=405.212，P＜0.01；1.30±0.20，3.15±0.17，4.07±0.19 vs0.36±0.09，F(xiàn)=816.655，P＜0.01)。
　　 免疫組織化學(xué)染色圖像分析結(jié)果的相關(guān)性分析：CollagenⅢ的表達(dá)變化與TGFβ1、Smad3、p-Smad2/3的表達(dá)變化均成正相

8、關(guān)(r=0.926，0.987，0.857，P＜0.01)。
　　 Western blot檢測(cè)：與正常對(duì)照組相比，rmIGFBPrP14周組、TAA2周組和TAA4周組IGFBPrP1、TGFβ1、Smad3、p-Smad2/3、CollagenⅠ和FN的表達(dá)明顯升高(1.68±0.18，1.46±0.12，2.39±0.23 vs0.91±0.07，F(xiàn)=42.767，P＜0.01；0.60±0.04，0.73±0.08，0.

9、88±0.07 vs0.31±0.02，F(xiàn)=49.797，P＜0.01；1.18±0.12，1.56±0.10，1.84±0.21 vs0.65±0.09，F(xiàn)=40.069，P＜0.01；2.16±0.28，3.21±0.19，2.64±0.27 vs1.20±0.19，F(xiàn)=38.954，P＜0.01；1.28±0.12，1.48±0.12，1.82±0.19 vs0.51±0.15，F(xiàn)=37.096，P＜0.01；0.60±0.05，

10、0.64±0.04，0.83±0.05 vs0.39±0.06，F(xiàn)=43.284，P＜0.01)。rmIGFBPrP14周組IGFBPrP1、CollagenⅠ和FN的表達(dá)與TAA2周組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 Western blot檢測(cè)圖像分析結(jié)果的相關(guān)性分析：CollagenⅠ的表達(dá)變化與TGFβ1、Smad3、p-Smad2/3的表達(dá)變化均成正相關(guān)(r=0.956，0.931，0.802，P＜0.01)；FN的表達(dá)變化與