IGFBPrP1siRNA誘導(dǎo)的大鼠肝星狀細胞凋亡及其機制.pdf

1、目的
　　 研究IGFBPrP1siRNA對大鼠肝星狀細胞凋亡的影響，并探討其可能的機制。
　　 方法
　　 體外培養(yǎng)大鼠肝星狀細胞株（HSC-T6），分別設(shè)立：（1）正常對照組：不加任何轉(zhuǎn)染試劑，不加siRNA；（2）陰性對照組：加轉(zhuǎn)染試劑和陰性對照siRNA；（3）IGFBPrP1siRNA轉(zhuǎn)染組：加轉(zhuǎn)染試劑和IGFBPrP1siRNA。
　　 IGFBPrP1siRNA 轉(zhuǎn)染大鼠肝星狀細胞，轉(zhuǎn)染不同

2、時間（24h，48h，72h）后，用CCK-8試劑盒檢測肝星狀細胞增殖的變化，AnnexinV/PI 雙標(biāo)法流式細胞術(shù)檢測肝星狀細胞凋亡的變化，免疫細胞化學(xué)染色法檢測肝星狀細胞中P53、Bcl-2蛋白表達的變化。
　　 結(jié)果
　　 （1）CCK-8 檢測結(jié)果顯示：IGFBPrP1siRNA 轉(zhuǎn)染大鼠肝星狀細胞不同時間（24h，48h，72h）后，各時間點IGFBPrP1siRNA 轉(zhuǎn)染組OD值減小，與正常對照組及陰性對照

3、組相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），各時間點IGFBPrP1siRNA 轉(zhuǎn)染組細胞抑制率升高，與正常對照組及陰性對照組相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；
　　 （2）流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示：IGFBPrP1siRNA 轉(zhuǎn)染大鼠肝星狀細胞不同時間（24h，48h，72h）后，各時間點IGFBPrP1siRNA 轉(zhuǎn)染組凋亡率與正常對照組及陰性對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），而陰性對照組與正常對照組相比，

4、差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；
　　 （3）免疫細胞化學(xué)染色結(jié)果顯示：IGFBPrP1siRNA 轉(zhuǎn)染大鼠肝星狀細胞48h后，P53蛋白的表達：各組均呈P53 陽性表達，即細胞胞核內(nèi)均可見清晰的棕黃色或棕褐色顆粒沉積，但各組在陽性細胞數(shù)量與著色深淺上有所不同。圖像分析及數(shù)據(jù)統(tǒng)計結(jié)果顯示：與正常對照組及陰性對照組相比，轉(zhuǎn)染組P53蛋白的表達量顯著增高（F=84.792，P<0.01）；Bcl-2蛋白的表達：各組均呈Bcl-2

5、陽性表達，即細胞胞漿內(nèi)均可見清晰的棕黃色或棕褐色顆粒沉積，但各組在陽性細胞數(shù)量與著色深淺上有所不同。圖像分析及數(shù)據(jù)統(tǒng)計結(jié)果顯示：與正常對照組及陰性對照組相比，轉(zhuǎn)染組Bcl-2蛋白的表達量明顯降低（F=235.407，P<0.01）。
　　 結(jié)論
　　 （1）IGFBPrP1siRNA能顯著抑制大鼠肝星狀細胞的增殖且能促進其凋亡；
　　 （2）上調(diào)P53的表達，下調(diào)Bcl-2的表達可能是IGFBPrP1siRNA