白花丹藥物血清對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞增殖凋亡的影響.pdf

1、目的：觀察白花丹藥物血清對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞增殖及凋亡的影響，以及白花丹藥物血清作用后大鼠肝星狀細(xì)胞中細(xì)胞各周期 DNA含量百分比的改變，進(jìn)而探討白花丹抗肝纖維化的作用機(jī)制。
　　方法：SD大鼠24只，雌雄各半，隨機(jī)分為6組，每組4只，分別為：正常血清對(duì)照組（A組）、白花丹大、中、小劑量組（分別為B、C、D組）、秋水仙堿組（E組）、復(fù)方鱉甲軟肝片組（F組）。各組均以相應(yīng)藥物灌胃（正常血清對(duì)照組以生理鹽水灌胃），每次灌胃量均為1ml/1

2、00g體重。每天給藥兩次，間隔12h，連續(xù)給藥3d，末次給藥后1h采血（灌藥前禁食不禁水12h）。分離血清，同組血清相混后56℃水浴滅活30min，0.22μm微孔濾膜過濾除菌，-20℃冰箱保存?zhèn)溆?。臨用前加入DMEM培養(yǎng)液，分別配制成含5％、10%及20%藥物血清的培養(yǎng)基。孵育HSC-T624h后，MTT比色法檢測(cè)HSC-T6增殖；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果：1.與A組相比，B、C、D、E、F各藥物血清均可抑制

3、HSC-T6的增殖，差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均 P<0.01）；在5%～20%的血清濃度范圍內(nèi)，B、C、D、E、F各藥物血清對(duì)HSC-T6的抑制作用逐漸增強(qiáng)；同血清濃度B、C組增殖的抑制率均顯著高于E組（均P<0.01），C組增殖的抑制率與F組相當(dāng)；同血清濃度B、C、D組隨著白花丹灌胃劑量的減少，抑制作用逐漸減弱。2.細(xì)胞周期分析顯示：與A組相比，B、C、D、E、F各組HSC-T6 G0/G1期細(xì)胞百分比明顯增高（均P<0.01），B組

4、、C組明顯高于E組（均P<0.01），C組與F組相當(dāng)；B、C、D組隨著白花丹灌胃劑量減少，G0/G1期細(xì)胞百分比也下降。與A組相比，B、C、D、E、F各組HSC-T6 S期細(xì)胞百分比明顯降低（均P<0.01），B組、C組明顯低于E組（均P<0.01），C組與F組相當(dāng)；B、C、D組隨著白花丹灌胃劑量減少，S期細(xì)胞百分比逐漸增高。各組藥物血清干預(yù)后，G2/M期細(xì)胞百分比無明顯變化。3.與 A組相比，B、C、D、E、F各藥物血清組 HSC-T

5、6細(xì)胞凋亡率均明顯增高，差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）；B、C組的凋亡率顯著高于E組，差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01），C組的凋亡率與F組相當(dāng)；B、C、D組隨著白花丹灌胃劑量的減少，凋亡率也降低。
　　結(jié)論：1.白花丹藥物血清可以抑制HSC-T6增殖，誘導(dǎo)其凋亡，具有劑量依賴性。2.白花丹藥物血清抑制 HSC-T6增殖的可能機(jī)制是使HSC-T6細(xì)胞周期停滯于G0/G1期，阻止其通過 G1/S關(guān)卡。3.在抑制HSC