熊果酸對肝星狀細(xì)胞增殖與凋亡的影響.pdf

1、研究背景：肝纖維化是肝臟對各種原因所致肝損傷的創(chuàng)傷愈合反應(yīng)，是各種慢性肝病共有的病理基礎(chǔ)。近年來研究發(fā)現(xiàn)，肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cell,HSC)在肝纖維化形成過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，是肝纖維化時(shí)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的主要來源細(xì)胞。各種致病因素作用下引起肝損傷，通過旁分泌或自分泌釋放多種細(xì)胞因子，使肝星狀細(xì)胞激活，激活的HSC合成和分泌ECM增加；在肝纖維化逆轉(zhuǎn)過程中，持續(xù)的HSC凋亡發(fā)揮重要作用。因此，抑制肝星狀細(xì)

2、胞激活、誘導(dǎo)其凋亡為肝纖維化的治療提供了新的方法。本研究在進(jìn)行抗肝纖維化藥物篩選時(shí)發(fā)現(xiàn)熊果酸(Ursolic acid,UA)具有抗肝纖維化作用，本研究通過觀察熊果酸對肝星狀細(xì)胞增殖和凋亡的影響，初步探討熊果酸抗肝纖維化可能的作用機(jī)制。 目的：觀察熊果酸對肝星狀細(xì)胞增殖與凋亡的影響；觀察熊果酸對肝星狀細(xì)胞中Bcl-2,Bax和Caspase3蛋白表達(dá)的影響，旨在探討熊果酸誘導(dǎo)肝星狀細(xì)胞凋亡的可能作用機(jī)制。 方法：將不同濃

3、度熊果酸(25μM、50μM、75μM、100μM、125μM和150μM)作用于肝星狀細(xì)胞(HSC-T6)及肝細(xì)胞(LO2)，分別在藥物作用24h、48h、72h后采用MMT法觀察熊果酸對HSC-T6及LO2細(xì)胞增殖的影響；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測熊果酸對HSC-T6凋亡的影響；光鏡觀察熊果酸作用后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；通過免疫細(xì)胞化學(xué)術(shù)檢測HSC-T6中Bcl-2,Bax，和Caspase3蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： ①M(fèi)TT法檢測顯

4、示：25μM、50μM、75μM、100μM、125μM和150μM熊果酸均可以抑制HSC-T6細(xì)胞的增殖，且隨藥物濃度增加及作用時(shí)間延長，生長抑制率逐漸升高。 ②熊果酸濃度為25μM、50μM、75μM時(shí)可促進(jìn)LO2細(xì)胞增殖，但是，當(dāng)熊果酸濃度大于100μM時(shí)表現(xiàn)出抑制LO2細(xì)胞增殖。 ③HE染色顯示：熊果酸作用HSC-T6細(xì)胞48h后，光鏡下可見細(xì)胞縮小變圓，核濃縮等。 ④流式細(xì)胞儀檢測顯示：25μM、50μ

5、M、75μM熊果酸作用HSC-T6細(xì)胞48h后，細(xì)胞凋亡率分別為(10.30±3.85)％，(21.87±4.46)％，(31.33±6.18)％，比對照組(2.93±1.60)％明顯升高(P＜0.01)。 ⑤免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示：25μM、50μM、75μM熊果酸作用HSC-T6細(xì)胞48小時(shí)后，Bax及Caspase3蛋白表達(dá)較對照組升高(P＜0.05)，且呈劑量依賴性，而Bcl-2蛋白表達(dá)與對照組無明顯差異(P＞0.05)。

6、 結(jié)論： ①熊果酸在體外可以較明顯的抑制HSC-T6細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)HSC-T6細(xì)胞凋亡，作用強(qiáng)度呈劑量-時(shí)間依賴。 ②熊果酸對LO2細(xì)胞的生長具有雙向調(diào)節(jié)作用，低濃度促進(jìn)增殖，高濃度(≥100μM)抑制LO2細(xì)胞增殖。 ③熊果酸可以上調(diào)HSC-T6細(xì)胞Bax、Caspase3蛋白表達(dá)，但對Bcl-2蛋白無明顯影響。 ④熊果酸誘導(dǎo)HSC-T6細(xì)胞凋亡的機(jī)理可能是通過上調(diào)Bax蛋白，降低Bcl-2/