羥基喜樹堿對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞增殖與凋亡的影響.pdf

1、目的：探討羥基喜樹堿（HCPT）對(duì)體外培養(yǎng)的大鼠肝星狀細(xì)胞（HSC）和大鼠正常肝細(xì)胞增殖的影響，確定HCPT對(duì)HSC增殖抑制的最佳濃度；觀察HCPT對(duì)HSC凋亡的影響。為進(jìn)一步研究HCPT的抗肝纖維化作用奠定細(xì)胞生物學(xué)的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)；為拓寬喜樹堿的臨床應(yīng)用范圍提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：大鼠肝星狀細(xì)胞株（HSC-T6）和大鼠正常肝細(xì)胞株（BRL-3A）分別在實(shí)驗(yàn)組（分別以含HCPT濃度為0.008，0.016，0.031，0.0

2、63，0.125，0.25，0.5，1，2，4，8，16，32 mg/L的培養(yǎng)液作用）和對(duì)照組（單純培養(yǎng)）中體外培養(yǎng)24 h，48 h，72 h。應(yīng)用四甲基偶氮唑鹽法（MTT法）檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，確定HCPT對(duì)HSC-T6細(xì)胞增殖抑制的最佳濃度；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HCPT對(duì)HSC-T6細(xì)胞凋亡的影響；透射電鏡下觀察HSC-T6細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化；瓊脂糖凝膠電泳法觀察細(xì)胞凋亡的DNA片段化條帶。 結(jié)果：MTT法顯示24 h，48 h

3、，72 h實(shí)驗(yàn)組HSC-T6細(xì)胞的增殖率均低于對(duì)照組，差異具有顯著性（t=6.07～46.98，10.98～63.97，20.76～107.68，均P<0.01）；HCPT對(duì)HSC-T6細(xì)胞和BRL-3A細(xì)胞的增殖抑制率均隨著藥物作用濃度的升高及藥物作用時(shí)間的延長而逐漸升高；當(dāng)HCPT濃度>0.5 mg/L時(shí)，對(duì)BRL-3A細(xì)胞的毒性作用顯著性增高（均P<0.05）。0.25，0.5，1 mg/L的HCPT作用HSC-T6細(xì)胞24h，光

4、鏡下均可見細(xì)胞數(shù)量減少、體積縮小、核濃縮等變化，且隨著作用濃度的增加變化更加明顯。0.125，0.25，0.5 mg/L的HCPT作用HSC-T6細(xì)胞24h，流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示細(xì)胞凋亡率分別為：13.46％±2.42％，26.25％±5.65％，47.05％±8.76％，與對(duì)照組（4.89％±1.80％）相比，差異有顯著性（F=34.24，P<0.01）。0.5mg/L的HCPT作用HSC-T6細(xì)胞24h，透射電鏡下可見細(xì)胞體積縮小，核