雷帕霉素誘導(dǎo)大鼠肝星狀細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、目的：
　　 1、觀察不同濃度雷帕霉素(RAPA)對大鼠肝星狀細(xì)胞(rHSCs-99)增殖、凋亡及Ⅰ型膠源含量的影響；
　　 2、觀察不同濃度PAPA對rHSCs-99 Fas蛋白及P53、Bcl-2蛋白表達(dá)情況。
　　 方法：
　　 將rHSCs-99分成4組：A(陰性對照組)：加培養(yǎng)液；B：PAPA50nmol/L；C：PAPA100nmol/L，D：PAPA150nmol/L。PAPA作用48h或7

2、2h后進(jìn)行以下檢測：
　　 1、采用MTT法檢測rHSCs增殖；
　　 2、ELIS^法檢測Ⅰ型膠原表達(dá)；
　　 3、流式細(xì)胞儀Annexin-V FICT/PI檢測細(xì)胞凋亡情況；
　　 4、Wright-Giemsa染色法觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變；
　　 5、細(xì)胞免疫組化法檢測Fas蛋白、P53與Bcl-2的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：
　　 1、MTT法示A、B、C、D四組48h和72h

3、后的OD值分別為0.956±0.055、0.870±0.055、0.795±0.087、0.645±0.073和1.243±0.073、1.131±0.058、1.022±0.082、0.848±0.133。與對照組相比，在PAPA100、150 nmol/L兩組可抑制rHSCs-99的增殖(P＜0.05)；72h各組存活率低于相應(yīng)48h各組(P＜0.05)，并呈時間—濃度依賴性。
　　 2、ELISA法示A、B、C、D四組Ⅰ型

4、膠原的含量分別為134.350±6.133 ng/ml、136.371±7.888 ng/ml、121.901±9.943 ng/ml和114.491±8.534 ng/ml。與對照組相比，PAPA100、150 nmol/L兩組可減少Ⅰ型膠原含量(P＜0.05)，并呈濃度依賴性(P＜0.05)。
　　 3、流式細(xì)胞儀Annexin-V FICT/PI法示A、B、C、D四組凋亡率分別為0.3％±0.1％、4.82％±1.17％、

5、12.97％±1.39％和17.7％±1.39％。與對照組相比，PAPA各組均可促進(jìn)rHSCs-99發(fā)生凋亡(P＜0.05)，并呈濃度依賴性(P＜0.05)。
　　 4、Wright-Giemsa染色顯示rHSCs-99發(fā)生皺縮，染色質(zhì)凝集和核固縮等典型的凋亡形態(tài)改變；
　　 5、免疫細(xì)胞組化法示Fas、P53蛋白表達(dá)增多，Bcl-2蛋白表達(dá)減低。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，與對照組相比，在RAPA濃度為100、150nmol/L時，