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文檔簡介
1、目的:觀察全骨髓貼壁法分離、培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)的傳代、鑒定及成骨分化、成脂分化的情況,為進一步研究BMSCs提供功能穩(wěn)定的種子細胞。
方法:采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法對SD大鼠BMSCs進行分離、培養(yǎng)、純化。在倒置相差顯微鏡下動態(tài)觀察活體細胞形態(tài)學改變;MTT比色法測定OD值繪制生長曲線;用流式細胞儀鑒定BMSCs表面抗原;使用成骨誘導液及成脂誘導液分別誘導其向成骨細胞、成脂肪細胞分化。
結(jié)果:(1)全
2、骨髓貼壁法分離培養(yǎng)的BMSCs為貼壁生長的成纖維樣細胞,傳代后的細胞形態(tài)均一,呈漩渦狀排列。(2)第3代BMSCs的生長曲線呈‘S’形,經(jīng)歷了三個生長時期:潛伏期、對數(shù)生長期和停滯期。(3)流式細胞儀檢測BMSCs表面抗原結(jié)果示:CD29+99.45%、CD34+1.45%、CD44+99.52%、CD45+1.41%。(4)成骨、成脂細胞誘導分化后,分別使用茜素紅及油紅‘O’染色,其中礦化結(jié)節(jié)被染成橘紅色、脂滴被染成紅色。
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