膠囊滲透壓泵控釋IGFBPrP1對(duì)小鼠肝肺組織的影響.pdf

1、研究背景：
　　 胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1(insulin-like growth-factor binding protein-relatedprotein 1，IGFBPrP1）是一種可溶性細(xì)胞黏附糖蛋白，由腫瘤細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞等多種細(xì)胞分泌，Lopez-Bermejo等和Ma等的研究發(fā)現(xiàn)IGFBPrP1蛋白廣泛表達(dá)于人體各種組織細(xì)胞并起著相當(dāng)重要的作用，能夠調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞和纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)、

2、增殖、黏附，促進(jìn)血管形成，刺激內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生前列環(huán)素，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等多種功能。
　　 目前有關(guān)IGFBPrP1蛋白功能尚不是完全清楚。導(dǎo)師劉立新課題研究小組發(fā)現(xiàn)：用重組IGFBPrP1能使體外培養(yǎng)的肝星狀細(xì)胞株HSC-T6 活化，且在一定的劑量范圍內(nèi)隨著IGFBPrP1劑量的增加HSC的活化程度逐漸增強(qiáng)；抗IGFBPrP1抗體通過(guò)抑制肝纖維化小鼠肝臟HSC的活化、減少ECM的生成及減少肝細(xì)胞的凋亡等途徑發(fā)揮抗纖維化作用。
　

3、　 IGFBPrP1可促進(jìn)體外培養(yǎng)的肝星狀細(xì)胞過(guò)表達(dá)TGF-β1及細(xì)胞外基質(zhì)，增多的細(xì)胞外基質(zhì)是由TGF β1通過(guò)Smad3信號(hào)通路介導(dǎo)的。IGFBPrP1可能是肝纖維化發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的一種新的因子。
　　 IGFBPrP1的生物學(xué)功能還有待進(jìn)一步研究：一方面，腹腔注射動(dòng)物給藥IGFBPrP1半衰期短，有藥物濃度高峰，代謝快，不能真正了解IGFBPrP1蛋白的功能；另一方面，IGFBPrP1有致肝纖維化的作用，對(duì)其他臟器是否也

4、有影響及其可能機(jī)制是什么也尚未明確。為了闡明此問(wèn)題，設(shè)計(jì)了本課題。
　　 目的：
　　 比較IGFBPrP1對(duì)小鼠肝、肺組織作用的異同，探討IGFBPrP1對(duì)小鼠肝、肺組織的影響及其可能機(jī)制。
　　 方法：
　　 24只3周齡SPF級(jí)雄性C57 BL/6 野生型小鼠，體重（12±2）g，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供。隨機(jī)分為3組：手術(shù)組（8只）用1％水合氯醛麻備小鼠，于小鼠后背部皮下行一0.5 厘米

5、左右橫切口，組織鉗由切口處皮下向小鼠后背部撐出一個(gè)膠囊大小的空間（空間應(yīng)大到膠囊泵體可以有一定移動(dòng)度，但不能讓泵體輕易滑到小鼠側(cè)翼），行手術(shù)植入注滿100μg/ml IGFBPrP1溶液的膠囊滲透壓泵（輸藥管釋出口要朝內(nèi)塞入皮下，不可反向以致釋出口剛好在傷口之下）。膠囊泵連續(xù)恒定釋放IGFBPrP1溶液，泵容積90μl，泵速0.11μl/h，持續(xù)4周。假手術(shù)組（8只）行單純對(duì)照手術(shù)切開(kāi)縫合不植入膠囊泵，正常組（8只）不作處理。在第4周末

6、禁食10h后，乙醚麻醉采集肝、肺組織用10％中性甲醛固定，石蠟包埋，切片。（1）分別對(duì)肝、肺組織石蠟切片做HE 染色和苦味酸-天狼猩紅染色觀察肝、肺組織病理變化及膠原纖維形成情況；（2）免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)肝、肺組織中IGFBPrP1、Ⅲ型膠原（Collagen Ⅲ）、Smad3及p-Smad2/3的表達(dá)；（3）TUNEL 法檢測(cè)各組肝組織中肝細(xì)胞凋亡情況。
　　 結(jié)果：
　　 （1）苦味酸-天狼猩紅染色結(jié)果：手術(shù)組肝組

7、織中膠原纖維含量較正常組和假手術(shù)組明顯增多（0.46％±0.09％vs1.27.％±0.10％，0.45％±0.08％vs1.27.％±0.10％，F(xiàn)=597.797，P＜0.01），手術(shù)組肺組織中膠原纖維含量較其他兩組差異不明顯（0.35％±0.09％vs0.36％±0.12％，0.37％±0.12％vs0.36％±0.12％，F(xiàn)=0.344，P>0.05）。
　　 （2）免疫組織化學(xué)染色結(jié)果：手術(shù)組肝組織中IGFBPrP1、

8、Ⅲ型膠原（Collagen Ⅲ）及p-Smad2/3的表達(dá)均較正常組和假手術(shù)組顯著增強(qiáng)，Smad3表達(dá)未見(jiàn)增強(qiáng)。（IGFBPrP1：0.26±0.04vs1.77±0.64，0.25±0.04vs1.77±0.64，F(xiàn)=44.064，P＜0.01；Collagen Ⅲ：0.45±0.04vs2.59±0.29，0.43±0.05vs2.59±0.29，F(xiàn)=431.641，P＜0.01；p-Smad2/3：0.53±0.07vs2.44±

9、0.32，0.51±0.08vs2.44±0.32，F(xiàn)=114.251，P＜0.01；Smad3：0.29±0.06vs0.33±0.04，0.34±0.04vs0.33±0.04，F(xiàn)=1.928，P＞0.05）。手術(shù)組肺組織中IGFBPrP1、Ⅲ型膠原（CollagenⅢ）、Smad3及p-Smad2/3的表達(dá)較其他兩組差異不明顯（IGFBPrP1：0.32±0.05vs0.30±0.07，0.29±0.06vs0.30±0.07，F(xiàn)

10、=0.505，P＞0.05；Collagen Ⅲ：0.93±0.07vs0.89±0.02，0.85±0.01vs0.89±0.02，F(xiàn)=0.973，P＞0.05；Smad3：0.26±0.03vs0.25±0.04，0.24±0.09vs0.25±0.04，F(xiàn)=0.150，P＞0.05；p-Smad2/3：0.25±0.06vs0.26±0.05，0.28±0.06vs0.26±0.05，F(xiàn)=0.255，P＞0.05）。
　　

11、 （3）TUNEL 法檢測(cè)肝細(xì)胞凋亡結(jié)果：熒光顯微鏡下和普通光鏡下手術(shù)組肝組織中凋亡肝細(xì)胞較正常組和假手術(shù)組明顯增多（6.21％±2.83％vs34.14％±11.04％，7.13％±2.59％vs34.14％±11.04％，F(xiàn)=114.251，P＜0.01；6.10％±2.23％vs32.23％±10.60％，5.71％±2.87％vs32.23％±10.60％，F(xiàn)=114.251，P＜0.01）。
　　 結(jié)論：