肝硬化患者肝組織中IGFBPrP1與TGF-β1-Smad信號(hào)通路的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景：肝硬化是一種常見(jiàn)的由不同病因引起的慢性、進(jìn)行性、彌漫性肝病，而肝纖維化是肝硬化發(fā)生的前奏和必經(jīng)中間環(huán)節(jié)?，F(xiàn)如今對(duì)肝纖維化肝硬化機(jī)制的研究已發(fā)展到分子生物學(xué)水平，但仍未完全闡明。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子—β1(TGF—β1)是目前公認(rèn)最強(qiáng)的促纖維化細(xì)胞因子之一，Smad3是介導(dǎo)TGF—β1誘導(dǎo)肝纖維化作用的關(guān)鍵信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子。胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白(IGFBPs)的功能是國(guó)際上研究的熱點(diǎn)。Boers等運(yùn)用基因表達(dá)序列分析方法(SAGE)來(lái)探

2、測(cè)人類(lèi)和小鼠HSC轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞的過(guò)程中整個(gè)基因組轉(zhuǎn)錄的改變，結(jié)果顯示胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1(IGFBPrP1)mRNA在轉(zhuǎn)化中期的肝星狀細(xì)胞(HSC)中表達(dá)最高。導(dǎo)師劉立新等發(fā)現(xiàn)IGFBPrP1在TGF—β1誘導(dǎo)的活化HSC中表達(dá)明顯增強(qiáng)，且抗IGFBPrP1抗體可以拮抗TGF—β1誘導(dǎo)HSC過(guò)表達(dá)的CollagenⅠ；肝纖維化肝硬化患者肝組織中IGFBPrP1的表達(dá)較正常對(duì)照組明顯增強(qiáng)，且隨著病變程度的加重，其表達(dá)逐

3、漸增強(qiáng)；IGFBPrP1可激活HSC，且在一定劑量范圍內(nèi)隨著IGFBPrP1劑量的增加HSC活化的程度逐漸增強(qiáng)。為探討IGFBPrP1在肝硬化形成過(guò)程中可能的作用及與TGF—β1/Smad3信號(hào)通路的關(guān)系，設(shè)計(jì)了本課題。 目的：探討IGFBPrP1在肝硬化患者肝組織中的表達(dá)及與TGF—β1/Smad3信號(hào)通路的關(guān)系。 方法：31例肝組織蠟塊來(lái)自于2002年1月-2007年12月山西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院病理科。其中肝硬化

4、組16例，診斷符合“病毒性肝炎防治方案”；對(duì)照組15例，為手術(shù)切除肝血管瘤外正常肝組織(甲—戊型病毒性肝炎陰性)。蠟塊行5μm厚連續(xù)切片。按常規(guī)方法進(jìn)行HE及Masson染色，免疫組織化學(xué)染色觀察肝組織中IGFBPrP1、TGF—β1及Smad3的表達(dá)，通過(guò)IPP軟件對(duì)圖像進(jìn)行半定量分析。同時(shí)收集肝硬化組16例患者的血清HA化驗(yàn)結(jié)果。用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析。 結(jié)果： 1．HE染色結(jié)

5、果顯示：對(duì)照組肝細(xì)胞形態(tài)正常、排列整齊，肝小葉結(jié)構(gòu)完整；肝硬化組小葉結(jié)構(gòu)被破壞，形成假小葉，假小葉內(nèi)肝細(xì)胞排列紊亂，可見(jiàn)細(xì)胞腫脹變性，匯管區(qū)有大量炎性浸潤(rùn)和纖維組織增生，纖維間隔寬窄不等，并可見(jiàn)增生的小膽管。 2．Masson染色結(jié)果顯示：對(duì)照組僅在中央靜脈等血管壁有少量膠原沉積；肝硬化組在匯管區(qū)纖維組織大量沉積，纖維間隔向肝小葉結(jié)構(gòu)內(nèi)延伸，并包繞形成假小葉。肝硬化組較對(duì)照組膠原纖維的形成明顯增多，膠原纖維面密度值明顯升高(6.

6、347±1.353vs1.120±0.212，P＜0.01)。 3．免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示：FGF—β1在正常對(duì)照組肝組織中少量表達(dá)于部分肝細(xì)胞胞漿及肝竇中，呈棕黃色著色；在肝硬化組肝組織中TGF—β1表達(dá)明顯增強(qiáng)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增多，在纖維間隔、匯管區(qū)內(nèi)的炎細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、Kupffer細(xì)胞胞漿及肝竇內(nèi)的星狀細(xì)胞和竇內(nèi)皮細(xì)胞中呈棕黃色及棕褐色沉著。Smad3在正常對(duì)照組肝組織肝細(xì)胞胞漿表達(dá)較為廣泛，呈淺黃色沉積，肝竇及纖維間隔

7、內(nèi)未見(jiàn)明顯表達(dá)；在肝硬化組，肝細(xì)胞胞漿著色增強(qiáng)，同時(shí)可見(jiàn)匯管區(qū)、纖維間隔及肝竇內(nèi)星狀細(xì)胞胞漿有明顯表達(dá)。IGFBPrP1在正常肝組織見(jiàn)極少數(shù)肝細(xì)胞有陽(yáng)性染色；在肝硬化組，肝竇內(nèi)及纖維間隔內(nèi)的肝星狀細(xì)胞，成纖維細(xì)胞，Kupffer細(xì)胞，以及纖維間隔周?chē)纳贁?shù)肝細(xì)胞，有明顯的陽(yáng)性染色。 4．免疫組織化學(xué)染色圖像分析結(jié)果顯示：TGF—β1、Smad3及IGFBPrP1在肝硬化患者肝組織中的表達(dá)較正常對(duì)照組均顯著增加(TGF—β1：39

8、00.04±742.05vs522.56±124.77，P＜0.01；Smad3：32083.22±8270.7vs5401.23±1470.07，P＜0.01；IGFBPrP1：37102.82±7449.23vs6597.85±2041.46，P＜0.01)。 5．肝組織IGFBPrP1的表達(dá)與肝組織膠原纖維的表達(dá)呈正相關(guān)(r值為0.880，P＜0.01)；肝組織IGFBPrP1的表達(dá)分別與肝組織TGF—β1的表達(dá)呈正相關(guān)(

9、r值為0.886，P＜0.01)；肝組織IGFBPrP1的表達(dá)分別與肝組織Smad3的表達(dá)呈正相關(guān)(r值為0.900，P＜0.01)；6．肝硬化組16例患者血清HA均明顯高于正常值(586.84±503.95)，肝硬化患者肝組織IGFBPrP1的表達(dá)與血清HA的表達(dá)呈正相關(guān)(r值為0.524，P＜0.05)。 結(jié)論： 1.肝硬化患者肝組織IGFBPrP1、TGF—β1、Smad3的表達(dá)比正常對(duì)照組明顯上調(diào)，且肝組織IGF