負(fù)載干細(xì)胞抗原的DC聯(lián)合CIK細(xì)胞對(duì)MCF-7-ADR細(xì)胞體內(nèi)外作用研究.pdf

1、目的：
　　研究乳腺癌干細(xì)胞抗原負(fù)載的樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)與細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK)聯(lián)合培養(yǎng)后對(duì)于體內(nèi)外MCF-7/ADR腫瘤細(xì)胞的殺傷效果。
　　方法：
　　1.培養(yǎng)MCF-7/ADR細(xì)胞，采用磁珠分選法分選CD44+CD24-乳腺癌干細(xì)胞。
　　2.用上述分選的CD44+CD24-乳腺癌干細(xì)胞注入nod-scid小鼠(n=30)脂肪墊下，建立乳腺癌荷瘤鼠模型。
　　3.由正常人外周血提取的單個(gè)核細(xì)

2、胞分別誘導(dǎo)培養(yǎng)DC細(xì)胞和CIK細(xì)胞，用透射電子顯微鏡鑒定DC超微形態(tài)，流式細(xì)胞術(shù)鑒定CD3+CD56+CIK細(xì)胞比例。
　　4.用乳腺癌細(xì)胞系MCF-7/ADR分別提取細(xì)胞凍融抗原和干細(xì)胞凍融抗原，并沖擊誘導(dǎo)成功的DC。
　　5.建立實(shí)驗(yàn)組:乳腺癌干細(xì)胞抗原沖擊的DC聯(lián)合CIK細(xì)胞組（BCSC-AP-DC+CIK組）;實(shí)驗(yàn)對(duì)照組:腫瘤抗原沖擊的DC聯(lián)合CIK細(xì)胞組(AP-DC+CIK組);對(duì)照組1:未經(jīng)抗原沖擊DC-CIK細(xì)

3、胞組(DC+CIK組);對(duì)照組2:單純CIK細(xì)胞組(CIK組)及空白對(duì)照組:生理鹽水組(NS組)。
　　6.用MTT法檢測(cè)上述各組在體外對(duì)MCF-7/ADR細(xì)胞的殺傷情況。
　　7.將各組細(xì)胞注入相應(yīng)各組乳腺癌荷瘤鼠體內(nèi)，觀察各組小鼠腫瘤組織生長(zhǎng)情況，比較各組小鼠在治療前后腫瘤體積差異，并對(duì)治療后5組小鼠腫瘤體積進(jìn)行比較。
　　8.用TUNEL法測(cè)定各組小鼠治療后腫瘤組織的凋亡情況，計(jì)算各組小鼠腫瘤組織的凋亡指數(shù)。

4、r>　　9.用免疫組織化學(xué)法測(cè)定各組小鼠在治療后腫瘤組織中bax及bcl-2表達(dá)情況，檢測(cè)其在體內(nèi)對(duì)乳腺癌組織的抑瘤效果。
　　結(jié)果：
　　1.經(jīng)磁珠分選法可成功分離出CD44+CD24-乳腺癌干細(xì)胞。
　　2.用CD44+CD24-乳腺癌細(xì)胞可成功建立乳腺癌荷瘤鼠模型。
　　3.外周血單個(gè)核細(xì)胞可誘導(dǎo)為DC和CIK細(xì)胞。誘導(dǎo)后的DC細(xì)胞具有典型的DC細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞器;與經(jīng)抗原活化后的DC共培養(yǎng)的CIK細(xì)胞CD3

5、+CD56+細(xì)胞比例比與未經(jīng)抗原活化的DC共培養(yǎng)的CIK及單獨(dú)CIK陽(yáng)性比例高，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4.在DC、CIK對(duì)MCF-7/ADR細(xì)胞的殺傷實(shí)驗(yàn)中:體外實(shí)驗(yàn)，5組間殺傷率差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=28.15，P＜0.05），進(jìn)一步兩兩比較，發(fā)現(xiàn)BCSC-AP-DC+CIK組和AP-DC+CIK組兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），其它各組間兩兩比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），BCSC-AP-DC+CIK

6、組殺傷率最高，NS組殺傷率最低。
　　5.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠腫瘤體積在治療后存在差異，同組小鼠腫瘤體積在治療前后也存在差異（P＜0.05），各組小鼠體積比較:BCSC-AP-DC+CIK＜AP-DC+CIK組＜DC+CIK組＜CIK組＜NS組。
　　6.TUNEL染色陽(yáng)性指數(shù)比較:BCSC-AP-DC+CIK＞AP-DC+CIK組＞DC+CIK組＞CIK組＞NS組。
　　7.免疫組化染色結(jié)果:各組bax免疫

7、組化結(jié)果IOD值比較:BCSC-AP-DC+CIK＞AP-DC+CIK組＞DC+CIK組＞CIK組＞NS組;各組bcl-2免疫組化結(jié)果IOD值比較:BCSC-AP-DC+CIK＜AP-DC+CIK組＜DC+CIK組＜CIK組＜NS組。
　　結(jié)論：
　　1.外周血單個(gè)核細(xì)胞能夠誘導(dǎo)培養(yǎng)出DC和CIK細(xì)胞，且與經(jīng)抗原沖擊的DC共培養(yǎng)的CIK細(xì)胞CD3+CD56+比例更高。
　　2.在體外實(shí)驗(yàn)中，與經(jīng)抗原沖擊的DC細(xì)胞聯(lián)合培