重組腺病毒介導(dǎo)的人ING4基因?qū)θ橄侔㎝CF-7-ADR細胞的抑癌及化療增敏作用的研究.pdf

1、目的：研究重組腺病毒介導(dǎo)的人ING4基因（inhibitor of growth4生長抑制因子4）表達對人乳腺癌MCF-7/ADR細胞的抑癌和化療增敏效應(yīng)及分子機制。
　　方法：將攜有ING4基因的復(fù)制缺陷型腺病毒載體Ad-ING4感染QBI-293A細胞，進行病毒擴增，并進一步將病毒純化及效價測定；RT-PCR法鑒定Ad-ING4基因在QBI-293A細胞、MCF-7/ADR細胞有效表達。分別采用CCK-8法測定ADM、5-FU

2、和CXT對MCF-7/ADR和MCF-7細胞的半數(shù)抑制濃度IC50，確定MCF-7/ADR的多藥耐藥性。用CCK-8法測定感染重組腺病毒Ad-ING4后，ADM、5-FU和CXT對MCF-7/ADR細胞的半數(shù)抑制濃度IC50，觀察其逆轉(zhuǎn)效果。探討ING4的抑癌和化療增敏的機制實驗分為5組：PBS陰性對照組、Ad-GFP空載體腺病毒組、Ad-ING4重組腺病毒組、ADR(多柔比星終濃度為3.0μg/mL)組、Ad-ING4+ADR(終濃度

3、為3.0μg/mL)組，應(yīng)用半定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和蛋白印跡法檢測各組ING4基因及蛋白質(zhì)在MCF-7/ADR細胞中的表達；CCK-8（cell counting kit-8）法檢測各組MCF-7/ADR細胞生長情況；流式細胞術(shù)（FCM）PI單染法和Annexin-V-PE/7-AAD雙熒光標記法分別檢測各組細胞周期和細胞凋亡情況；RT-PCR和蛋白印跡法檢測各組MCF-7/ADR細胞中Bax、bcl-2和Survi

4、vin（生存素）等相關(guān)基因的表達。
　　結(jié)果：腺病毒介導(dǎo)的ING4基因在MCF-7/ADR細胞中成功表達，ING4基因在MCF-7/ADR細胞中表達并不缺失并且對MCF-7/ADR細胞的多藥耐藥性有一定的逆轉(zhuǎn)效應(yīng)；Ad-ING4和ADR對MCF-7/ADR細胞生長均有明顯的生長抑制和促凋亡作用，Ad-ING4使MCF-7/ADR細胞周期阻滯在G2/M期，F(xiàn)=129.294，P＜0.05。Ad-ING4聯(lián)合ADR對細胞的生長抑制和促

5、凋亡作用更明顯，培養(yǎng)至第4天，其生長抑制率可達（73.13±3.78）%，顯著高于Ad-ING4組和ADR組的（19.29±1.53）%和（48.39±2.96）%，F(xiàn)=257.397，P<0.05；其凋亡率可達(26.48±3.13)%，顯著高于Ad-ING4組的（11.57±1.26）%和ADR組的（17.21±2.34）%，F(xiàn)=30.253，P=0.001。蛋白印跡法結(jié)果分析顯示，ING4基因和ADR能使Bax的表達增強；使bcl

6、-2和Survivin的表達下降。與其他組相比較，Ad-ING4聯(lián)合ADR上述效應(yīng)更顯著，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，F(xiàn)值為789.842、1070.079和287.565，P值均＜0.05。
　　結(jié)論：Ad-ING4在體外可抑制MCF-7/ADR細胞的生長，并誘導(dǎo)其凋亡，其對多柔比星的細胞毒作用具有增敏效應(yīng)，其機制可能不是直接下調(diào)耐藥相關(guān)基因MRP1、LRP、MDR1的表達來實現(xiàn)的，而是與ING4降低bcl-2/Bax比值和抑制Survi