凍融抗原負(fù)載的DC-CIK細(xì)胞對(duì)SKOV3的殺傷作用.pdf

1、目的：探討負(fù)載人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3凍融抗原(Ag)的樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)與細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK)共培養(yǎng)后，對(duì)DC及CIK細(xì)胞增殖的影響；探討與負(fù)載人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3或COC1凍融Ag的DC共培養(yǎng)的CIK細(xì)胞對(duì)SKOV3殺傷作用的影響。
　　 方法：選擇12例上皮性卵巢癌患者，分離其外周血，獲得單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)，用相應(yīng)的誘導(dǎo)因子體外誘導(dǎo)出DC與CIK細(xì)胞。
　　 分別收集處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SKOV3及

2、COC1細(xì)胞，用細(xì)胞凍融法提取Ag，并于DC培養(yǎng)的第5天將Ag加入DC中培養(yǎng)，使之成為負(fù)載Ag的DC。將經(jīng)Ag負(fù)載的DC與未經(jīng)Ag負(fù)載的DC分別和CIK細(xì)胞共培養(yǎng)后分組：實(shí)驗(yàn)組：將經(jīng)Ag負(fù)載的DC與CIK細(xì)胞共培養(yǎng)作為實(shí)驗(yàn)組(SKOV3Ag-DC+CIK組、COC1 Ag-DC+CIK組)。對(duì)照組：(1)將未經(jīng)Ag負(fù)載的DC與CIK共培養(yǎng)作為對(duì)照組1(DC+CIK組)；(2) CIK細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)作為對(duì)照組2（CIK組）；(3) DC單獨(dú)

3、培養(yǎng)作為對(duì)照組3(DC組)；(4)負(fù)載抗原的DC為對(duì)照組4（Ag-DC組）。
　　 自培養(yǎng)第1天到第20天，用臺(tái)盼蘭拒染法動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)CIK細(xì)胞的增殖情況，觀察DC及Ag負(fù)載的DC對(duì)CIK細(xì)胞增殖的影響。
　　 用流式細(xì)胞技術(shù)分析DC組、SKOV3Ag-DC組、SKOV3Ag-DC-CIK組中DC細(xì)胞的表型，觀察負(fù)載Ag及CIK對(duì)其增殖的影響。分析CIK組、DC-CIK組、SKOV3Ag-DC-CIK組中CIK細(xì)胞表型，觀察

4、DC及Ag-DC對(duì)CIK細(xì)胞增殖的影響。
　　 用乳酸脫氫酶釋放法檢測(cè)CIK組、DC-CIK組、Ag-DC-CIK組（包括SKOV3-DC-CIK及COC1-DC-CIK組）對(duì)SKOV3的殺傷活性，對(duì)比觀察DC、SKOV3Ag-DC及COC1Ag-DC對(duì)CIK細(xì)胞殺傷活性的影響。
　　 結(jié)果：與DC共培養(yǎng)后的CIK細(xì)胞的增殖速率大于單CIK細(xì)胞，但與同負(fù)載抗原的DC共培養(yǎng)的CIK細(xì)胞增殖率相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0。

5、05)；
　　 Ag-DC-CIK組中DC細(xì)胞成熟表型高于DC組及Ag-DC組(P＜0.01)；
　　 Ag-DC-CIK組中CIK細(xì)胞成熟表型高于CIK組及DC-CIK組(P＜0.01)；
　　 SKOV3-DC-CIK組對(duì)SKOV3殺傷率高于CIK組、DC-CIK組及COC1-DC-CIK組(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：(1)DC及負(fù)載SKOV3凍融Ag的DC與CIK共培養(yǎng)可促進(jìn)DC、CIK細(xì)胞的成