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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:探討負(fù)載人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3凍融抗原(Ag)的樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)與細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK)共培養(yǎng)后,對(duì)DC及CIK細(xì)胞增殖的影響;探討與負(fù)載人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3或COC1凍融Ag的DC共培養(yǎng)的CIK細(xì)胞對(duì)SKOV3殺傷作用的影響。
方法:選擇12例上皮性卵巢癌患者,分離其外周血,獲得單個(gè)核細(xì)胞(PBMC),用相應(yīng)的誘導(dǎo)因子體外誘導(dǎo)出DC與CIK細(xì)胞。
分別收集處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SKOV3及
2、COC1細(xì)胞,用細(xì)胞凍融法提取Ag,并于DC培養(yǎng)的第5天將Ag加入DC中培養(yǎng),使之成為負(fù)載Ag的DC。將經(jīng)Ag負(fù)載的DC與未經(jīng)Ag負(fù)載的DC分別和CIK細(xì)胞共培養(yǎng)后分組:實(shí)驗(yàn)組:將經(jīng)Ag負(fù)載的DC與CIK細(xì)胞共培養(yǎng)作為實(shí)驗(yàn)組(SKOV3Ag-DC+CIK組、COC1 Ag-DC+CIK組)。對(duì)照組:(1)將未經(jīng)Ag負(fù)載的DC與CIK共培養(yǎng)作為對(duì)照組1(DC+CIK組);(2) CIK細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)作為對(duì)照組2(CIK組);(3) DC單獨(dú)
3、培養(yǎng)作為對(duì)照組3(DC組);(4)負(fù)載抗原的DC為對(duì)照組4(Ag-DC組)。
自培養(yǎng)第1天到第20天,用臺(tái)盼蘭拒染法動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)CIK細(xì)胞的增殖情況,觀察DC及Ag負(fù)載的DC對(duì)CIK細(xì)胞增殖的影響。
用流式細(xì)胞技術(shù)分析DC組、SKOV3Ag-DC組、SKOV3Ag-DC-CIK組中DC細(xì)胞的表型,觀察負(fù)載Ag及CIK對(duì)其增殖的影響。分析CIK組、DC-CIK組、SKOV3Ag-DC-CIK組中CIK細(xì)胞表型,觀察
4、DC及Ag-DC對(duì)CIK細(xì)胞增殖的影響。
用乳酸脫氫酶釋放法檢測(cè)CIK組、DC-CIK組、Ag-DC-CIK組(包括SKOV3-DC-CIK及COC1-DC-CIK組)對(duì)SKOV3的殺傷活性,對(duì)比觀察DC、SKOV3Ag-DC及COC1Ag-DC對(duì)CIK細(xì)胞殺傷活性的影響。
結(jié)果:與DC共培養(yǎng)后的CIK細(xì)胞的增殖速率大于單CIK細(xì)胞,但與同負(fù)載抗原的DC共培養(yǎng)的CIK細(xì)胞增殖率相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0。
5、05);
Ag-DC-CIK組中DC細(xì)胞成熟表型高于DC組及Ag-DC組(P<0.01);
Ag-DC-CIK組中CIK細(xì)胞成熟表型高于CIK組及DC-CIK組(P<0.01);
SKOV3-DC-CIK組對(duì)SKOV3殺傷率高于CIK組、DC-CIK組及COC1-DC-CIK組(P<0.01)。
結(jié)論:(1)DC及負(fù)載SKOV3凍融Ag的DC與CIK共培養(yǎng)可促進(jìn)DC、CIK細(xì)胞的成
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