銅綠假單胞菌中RND外排泵基因調(diào)節(jié)及功能研究.pdf

1、銅綠假單胞菌(．Pseudomonas aeruginosa，PA)感染是目前各種醫(yī)院內(nèi)感染中最廣泛、最嚴(yán)重的問(wèn)題之一。有報(bào)道指出它所引起的院內(nèi)感染約占10％～35％，居病原菌之首。銅綠假單胞菌為一種條件致病菌，因天然具有多重耐藥性，臨床治療困難很大。通過(guò)研究其致病機(jī)理和耐藥機(jī)制，人們?cè)噲D了解并最終控制銅綠假單胞菌引起的感染。 在銅綠假單胞菌的耐藥性中起重要作用的因素是細(xì)胞膜的低通透性和在細(xì)胞膜上存在各種RND外排泵。分析銅綠假

2、單胞菌基因組信息的結(jié)果表明，在銅綠假單胞菌中一共有12種已知的及可能的RND外排泵系統(tǒng)。本研究在基因轉(zhuǎn)錄水平對(duì)這12個(gè)已知及可能的RND外排泵進(jìn)行了系統(tǒng)分析。將銅綠假單胞菌中所有編碼RND泵基因的啟動(dòng)子都克隆到一個(gè)帶有報(bào)告基因IuxCDABE的低拷貝質(zhì)粒上。通過(guò)檢測(cè)報(bào)道子的發(fā)光量，來(lái)研究這些RND基因的表達(dá)和調(diào)節(jié)。將這些質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到銅綠假單胞菌后，在各種條件下研究表達(dá)量的變化，揭示RND外排泵對(duì)不同化合物的外排功能。研究結(jié)果表明：慶大霉素

3、能誘導(dǎo)RND外排泵J和I的表達(dá)，RND外排泵J能被四環(huán)素誘導(dǎo)，但是不能被屬于同一類抗生素土霉素的誘導(dǎo)。12種RND外排泵中，有11種受到氨芐青霉素的誘導(dǎo)。有機(jī)溶劑如乙醚、乙酸乙酯不能誘導(dǎo)RND外排泵的表達(dá)。由基因PA4206、PA4207和PA4208組成的RND外排泵，不僅受抗生素的誘導(dǎo)，而且還受到金屬離子如鋅離子的調(diào)節(jié)。由基因PA2520、PA2521和PA2522組成的RND外排泵不僅能夠向外排出鋅離子、鈷離子，而且還能向外排出抗