醫(yī)院感染多重耐藥銅綠假單胞菌耐藥基因檢測及分布研究.pdf

1、目的:研究湖北十堰地區(qū)2010年度醫(yī)院感染多重耐藥銅綠假單胞菌臨床分離株的β-內(nèi)酰胺酶基因、氨基糖苷類修飾酶基因、消毒劑與磺胺類耐藥基因的分布規(guī)律，揭示銅綠假單胞菌的耐藥機制。指導(dǎo)臨床合理使用抗菌藥物，為減少耐藥菌株的流行及傳播奠定基礎(chǔ)。
　　方法:收集湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院2010年度50株醫(yī)院感染多重耐藥銅綠假單胞菌，K-B法檢測臨床常用抗菌藥物的藥敏結(jié)果，用瓊脂稀釋法測定醫(yī)院常用消毒劑苯扎溴銨的最低抑菌濃度(MIC)，并分

2、別用標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法檢測超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)、改良三維試驗檢測AmpC酶（AmpC）、非金屬碳青霉烯酶（KPC）、金屬酶（MBLS）等耐藥表型。用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR)檢測其β-內(nèi)酰胺酶基因、氨基糖苷類修飾酶（AMEs）基因、消毒劑與磺胺耐藥基因qacE△1-sul1。通過基因測序分析基因序列，揭示耐藥基因亞型分布。用多個分子標(biāo)志分型法，以25種耐藥基因為分子標(biāo)志作檢測結(jié)果的樣本聚類分析，檢測菌株的親緣性。
　　結(jié)果:5

3、0株醫(yī)院感染多重耐藥銅綠假單胞菌檢出不同的β-內(nèi)酰胺酶耐藥表型，其中26株檢出ESBLS，11株檢出AmpC酶，34株檢出MBLS，未檢出KPC酶。通過PCR及基因測序檢出：bla TEM-1基因10株、陽性率為20.0％，bla SHV基因5株、陽性率10.0%，bla OXA-10基因6株、陽性率12.0%，bla CARB-2基因11株、陽性率22.0%，bla IMP基因35株、陽性率70.0%，bla DHA基因3株、陽性率2

4、6.0%；未檢出bla OXA-1群、bla OXA-2群、bla PER、bla VEB、bla GES、bla VIM、bla SPM、bla GIM、bla KPC基因；oprD2基因陽性率為30.0%。對臨床常用四種氨基糖苷類抗菌藥物（慶大霉素、奈替米星、阿米卡星、妥布霉素）的耐藥表型不同，其中80%的菌株對四種氨基糖苷類抗菌藥物均耐藥，氨基糖苷類修飾酶(AMEs)基因檢測結(jié)果：aac(6’)-I基因5株、陽性率10.0%，aa

5、c(6’)-II基因32株、陽性率64.0%，ant(3″)-I基因11株、陽性率22.0%，ant(2″)-I基因24株、陽性率48%；未檢出aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(3)-Ⅲ、aac(3)-Ⅳ四種AMEs基因。對醫(yī)院常用消毒劑苯扎溴銨的MIC在8～32ug/ml之間，高于對照菌ATCC27853的MIC值（t檢驗，t=17.25，P＜0.01，有統(tǒng)計學(xué)意義）；消毒劑與磺胺耐藥相關(guān)基因qacE△1-sul1通過PCR

6、檢測及基因測序結(jié)果其陽性率為100%。聚類分析提示50株細(xì)菌之間有一定的親緣關(guān)系。
　　結(jié)論:
　　1、2010年度50株醫(yī)院感染多重耐藥銅綠假單胞菌對β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥與攜帶bla TEM、bla SHV、bla OXA-10群、bla CARB、bla IMP、bla DHA等基因以及膜孔蛋白基因oprD2缺失有關(guān)。基因序列分析分別為TEM-1、OXA-10、CARB-2亞型。
　　2、50株醫(yī)院感染多重耐藥

7、銅綠假單胞菌對氨基糖苷類抗菌藥物的耐藥情況嚴(yán)重；氨基糖苷類修飾酶(AMEs)基因檢測結(jié)果提示：湖北十堰市太和醫(yī)院醫(yī)院感染多重耐藥銅綠假單胞菌以攜帶aac(6’)-II和ant(2″)-I基因為主。
　　3、50株醫(yī)院感染多重耐藥銅綠假單胞菌對醫(yī)院常用消毒劑苯扎溴銨表現(xiàn)為耐藥；細(xì)菌攜帶消毒劑與磺胺類藥物耐藥相關(guān)基因(qacE△1-sul1)是其對消毒劑、滅菌劑耐藥的主要因素。
　　4、同源性分析結(jié)果提示：2010年度湖北醫(yī)藥學(xué)