優(yōu)質(zhì)肉雞脂肪沉積相關(guān)基因的篩選及其在前脂肪細胞分化過程中的表達研究.pdf

1、為了研究優(yōu)質(zhì)雞脂肪沉積的分子調(diào)控機制，本試驗采用優(yōu)質(zhì)雞HS1系為試驗材料，AA肉雞為對照，在個體和細胞水平上研究脂肪代謝相關(guān)基因的表達規(guī)律，以期找出調(diào)控脂質(zhì)代謝的候選基因，為優(yōu)質(zhì)雞的后續(xù)選育提供科學(xué)依據(jù)。
　　本試驗選取了AA肉雞和優(yōu)質(zhì)雞HS1系21 d胚胎的肝臟組織進行數(shù)字基因表達譜測序分析(DGE)，篩選出了品種間差異表達的基因，尤其是脂肪代謝相關(guān)基因，從轉(zhuǎn)錄組水平分析兩種雞脂肪代謝存在差異的遺傳機理;運用Real-Time

2、PCR定量分析AA肉雞和優(yōu)質(zhì)雞HS1系在28 d、49 d和70 d時ACC、FAS、PGC-1α、PPARγSREBP-1c和PLIN1基因的表達，從個體水平上研究DGE所得結(jié)果;取12d的AA肉雞腹部脂肪，培養(yǎng)原代雞前脂肪細胞，分析ACC、FAS、PGC-1α、PPARγ、 SREBP-1c和PLIN1基因在脂肪細胞分化過程中的表達規(guī)律，從細胞水平上探究候選基因在脂肪細胞分化過程中的作用機制。
　　采用DGE技術(shù)對AA肉雞和優(yōu)

3、質(zhì)雞HS1系肝臟轉(zhuǎn)錄組測序，每個文庫分別獲得了約690-957萬個的表達標簽，約685-950萬個的Clean data;通過比對，鑒定出14977個基因，其中有1270個基因在P＜0.05水平上存在顯著差異，有493個基因在P＜0.01水平上存在差異極顯著。通過GO和Pathway分析，這些差異基因富集到細胞凋亡、細胞循環(huán)、鞘脂類代謝、醚脂類代謝、PPARs信號通路、脂肪細胞因子信號通路、mTOR信號通路和胰島素信號通路等生物學(xué)過程。

4、其中，有34個與脂代謝相關(guān)的基因在AA肉雞和優(yōu)質(zhì)雞HS1系間差異顯著，包括PPARγ和PLIN1等基因。脂肪代謝相關(guān)因子PPARγ和PLIN1在優(yōu)質(zhì)肉雞HS1系肝臟中的表達量分別是AA肉雞的3.79和5.42倍。此外，與PPARγ密切相關(guān)的幾個基因SREBP-1c、FAS、ACC和PGC-1α在AA肉雞和優(yōu)質(zhì)雞HS1系間也存在差異，其倍比分別為0.29、0.76、0.17和0.61。
　　定量分析AA肉雞和優(yōu)質(zhì)雞HS1系肝臟、腹脂

5、和皮脂中幾個候選基因，發(fā)現(xiàn)品種、日齡和組織因素對ACC、FAS、PGC-1α、PPARγ、 SREBP-1c和PLIN1基因的表達均存在較大影響，具體表現(xiàn)為除脂肪合成相關(guān)基因FAS外，其它五個基因在28d、49 d和70 d時在優(yōu)質(zhì)雞HS1系的肝臟和腹脂中的表達量均高于AA肉雞;隨著日齡的增加，ACC、FAS、PPARγ、 SREBP-1c和PLIN1在優(yōu)質(zhì)雞HS1系腹脂中的表達均呈先降低后升高趨勢，PGC-1α在兩種雞肝臟中均呈先增后

6、減趨勢，在腹脂中均呈不斷上升趨勢;PGC-1α在肝臟中的表達量高于腹脂和皮脂，ACC、FAS、SREBP-1c、PPARγ和PLIN1均表現(xiàn)為在腹脂中表達量高于肝臟和皮脂。
　　此外，本試驗進行了雞前脂肪細胞的原代培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化。采用CCK-8法檢測細胞生長曲線，發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)組和對照組雞前體脂肪細胞都在36h時開始大量增殖;60h時增殖速度達到最大;72h時細胞增殖速度下降。采用油紅O提取比色法測定細胞內(nèi)脂肪含量，發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)組和對照組前

7、脂肪細胞內(nèi)脂肪含量均在24 h較少，24 h后開始大幅度增加，60 h時達到最高水平;72h時明顯下降，且表現(xiàn)為誘導(dǎo)后24 h開始誘導(dǎo)組脂肪含量高于對照組。同時，對脂肪細胞分化過程中對ACC、FAS、PGC-1α、PPARγ、SREBP-1c和PLIN1進行定量分析，發(fā)現(xiàn)這些基因在的表達均表現(xiàn)為在48 h表達量最高，24 h和70 h表達量相對較低;且誘導(dǎo)分化48 h和70 h的表達量均為誘導(dǎo)組高于對照組。
　　本試驗首次利用數(shù)字

8、基因表達譜技術(shù)全面篩選了AA肉雞和優(yōu)質(zhì)雞HS1系21 d胚胎肝臟中差異表達基因，鑒定出了14977個在AA肉雞和優(yōu)質(zhì)雞HS1系上表達的基因，其中1270個存在顯著差異。AA肉雞和優(yōu)質(zhì)雞HS1系生長過程中，品種、日齡和組織因素對ACC、FAS、PGC-1α、PPARγ、 SREBP-1c和PLIN1基因的表達均存在較大影響。脂肪細胞分化過程中ACC、SREBP-1c和PLIN1的表達在誘導(dǎo)分化后48h和70 h誘導(dǎo)組顯著高于對照組，F(xiàn)AS