脂肪細(xì)胞分化過程中PAI-1基因表達(dá)的調(diào)控.pdf

1、近年來,肥胖逐漸被認(rèn)識(shí)到是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化和心血秘疾病的重要危險(xiǎn)因素之一.并在許多代謝性疾病如高甘油脂血癥,高血壓,主胰島素血癥和非胰島素依賴性糖尿病等有著密切的相關(guān)性.體外進(jìn)行肥胖研究主要是用3T3-L1或3T3-F442A作為模型.在3T3-L1細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞的過程中,胰島素（Iinsulin,Ins),地塞米松（dexamethasone,Dex)及甲基異丁基黃嘌吟（methylisobutylxanthine,Mix)是前脂

2、肪細(xì)胞轉(zhuǎn)化為成熟脂肪細(xì)胞的關(guān)鍵誘導(dǎo)因子.該文首先檢測(cè)了在3T3-L1細(xì)胞分化過程中,Ins,Dex及Mix對(duì)PAI-1基因表達(dá)的影響.然后分析并鑒定了小鼠PAI-1啟動(dòng)子中影響PAI-1表達(dá)的Ins和Dex及C/EBPs順式作用元件（cis-acting element),最后在C57BL/6J小鼠中觀察了Ins,Dex對(duì)小鼠附睪脂肪墊中PAI-1基因表達(dá)的影響.一胰島素、地塞米松和甲基異丁基黃嘌呤對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化過程中PA

3、I-1基因表達(dá)的影響;為研究胰島素,地塞米松和甲基異丁黃嘌呤對(duì)脂肪細(xì)胞分化過程及纖溶酶原激活劑抑制劑-1（PAI-1）基因表達(dá)的影響.利用體外培養(yǎng)的3T3-L1細(xì)胞分化模型,觀察了胰島素與地塞米松及甲基異丁黃嘌呤加入前后脂肪細(xì)胞形態(tài)的變化.并應(yīng)用RT-PCR方法,在不同濃度的Ins,Dex和Mix及其不同組合的條件下,對(duì)3T3-L1細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞過程中PAI-1mRNA表達(dá)水平進(jìn)行相對(duì)定量分析（以β-actin為內(nèi)對(duì)照）.我們的研究

4、結(jié)果表明：在Ins,Dex,Mix三因子單獨(dú)及其不同組合,Ins,Dex單獨(dú)及Ins加Dex都對(duì)3T3-L1細(xì)胞中PAI-1基因的表達(dá)有顯著促進(jìn)作用,尤以后者最為顯著并表現(xiàn)出疊加效應(yīng),這為進(jìn)一步研究PAI-1啟動(dòng)子上的相應(yīng)順式元件,搜尋Ins,Dex對(duì)PAI-1基因表達(dá)的作用機(jī)制提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ).二小鼠PAI-1基因啟動(dòng)子中Dex和C/EBPs順式作用元件的分析和鑒定;在研究了Ins,Dex和Mix對(duì)脂肪細(xì)胞分化過程中PAI-1基因表達(dá)的

5、影響的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探討Ins,Dex調(diào)控PAI-1基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的機(jī)制,應(yīng)用限制性內(nèi)切酶,PCR擴(kuò)增和DNA重組技術(shù),構(gòu)建含螢光素酶(Luciferase)基因和PAI-1啟動(dòng)子（Promoter)不同長(zhǎng)度片段的嵌合質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染3T3-L1前脂肪細(xì)胞并測(cè)定報(bào)告基因（Luciferase)的活性.結(jié)果提示：Dex可能是通過激活轉(zhuǎn)錄因子（糖皮質(zhì)激素受體,GR）與DexRE的結(jié)合來促進(jìn)PAI-1基因的表達(dá),同時(shí)在完全分3T3-L1脂肪細(xì)胞中,C