鴨前脂肪細(xì)胞分化調(diào)控及FAS與SCD1基因的克隆與表達(dá).pdf

1、脂肪組織是禽類脂質(zhì)沉積的主要部位，在穩(wěn)定機(jī)體代謝平衡中發(fā)揮重要作用。前脂肪細(xì)胞是一類具有增殖和定向分化為脂肪細(xì)胞的前體細(xì)胞，目前關(guān)于水禽前脂肪細(xì)胞的體外培養(yǎng)及其分化調(diào)控還缺乏系統(tǒng)的認(rèn)識(shí)。本研究以北京鴨為試驗(yàn)材料，首次分離培養(yǎng)鴨前脂肪細(xì)胞，摸索最佳誘導(dǎo)方式，建立一個(gè)體外誘導(dǎo)細(xì)胞分化的模型;其次，利用體外分離培養(yǎng)前脂肪細(xì)胞的模型，分別研究了羅格列酮(RSG)、胰島素和地塞米松(DEX)三種因素對(duì)鴨前脂肪細(xì)胞分化的調(diào)控機(jī)理。最后，克隆脂肪分化

2、關(guān)鍵基因FAS和SCD1，檢測其發(fā)育性表達(dá)模式，初步探討二者在脂肪分化過程中的作用。本研究取得的主要結(jié)果和結(jié)論如下:
　　(1)以一周齡農(nóng)華肉鴨皮下脂肪組織為材料，用膠原酶消化法可以分離培養(yǎng)出較多的成分均一原代前脂肪細(xì)胞。鴨前脂肪細(xì)胞在接種后的第三天開始迅速增殖，第七天后細(xì)胞生長進(jìn)入平臺(tái)期。在胰島素，DEX，IBMX和油酸的共同誘導(dǎo)下，梭形的前脂肪細(xì)胞，經(jīng)過8天的誘導(dǎo)，大多數(shù)細(xì)胞分化為圓形的成熟脂肪細(xì)胞。此時(shí)細(xì)胞內(nèi)沉積大脂滴，油紅

3、O染色為紅色證實(shí)細(xì)胞已分化成熟。鴨前脂肪細(xì)胞分化過程中，C/EBPα表達(dá)量呈上升趨勢，并在分化第五天達(dá)到峰值，然后再降低;PPARγ表達(dá)在分化第三天最大，然后逐漸降低;而FABP4在整個(gè)分化過程中都呈現(xiàn)增強(qiáng)的表達(dá)趨勢，在分化末期表達(dá)量最大。
　　(2)羅格列酮對(duì)鴨脂肪分化的影響主要體現(xiàn)在脂肪合成與酯解兩方面。添加羅格列酮處理體外分離培養(yǎng)鴨皮下前脂肪細(xì)胞，無論是否添加油酸誘導(dǎo)細(xì)胞分化，羅格列酮都能顯著提高鴨前脂肪細(xì)胞分化，促進(jìn)脂肪形

4、成。一方面，羅格列酮能顯著提高脂肪合成相關(guān)基因mRNA表達(dá)量（如:FAS，ACC，SCD1，PLIN等）以及蛋白含量(如:FAS，ACC)，誘導(dǎo)細(xì)胞分化;另一方面，羅格列酮也能提高細(xì)胞內(nèi)ATGL的mRNA表達(dá)量與ATGL蛋白濃度，提高游離脂肪酸釋放，促進(jìn)脂肪細(xì)胞酯解的進(jìn)行。表明羅格列酮從脂肪生成和酯解兩方面共同調(diào)控鴨前脂肪細(xì)胞分化。
　　(3)胰島素和DEX對(duì)鴨皮脂和腹脂中前脂肪細(xì)胞分化有不同的的影響。分別添加胰島素和DEX處理鴨

5、皮脂和腹脂分離的前脂肪細(xì)胞，DEX能上調(diào)皮脂前脂肪細(xì)胞中大多數(shù)生脂基因的表達(dá)量（如:FAS，SCD1，SREBP1c，GPAT，DGAT2等），但是胰島素會(huì)降低大多數(shù)生脂基因表達(dá)（FAS，ACC，SCD1，PPARγ，ADRP，DGAT2等），且胰島素和DEX共同作用也會(huì)導(dǎo)致以上大多數(shù)基因表達(dá)下降。在腹脂前脂肪細(xì)胞中，DEX可提高FAS，SCD1，GPAT，PPARγ，ADRP基因mRNA表達(dá)量，胰島素降低高FAS，SCD1，SREBP

6、1c，ELOVL6，C/EBPα，LPL基因mRNA表達(dá)量，胰島素和DEX共同作用都能引起大多數(shù)生脂基因表達(dá)量增加。在皮脂前脂肪細(xì)胞中，胰島素和DEX都未對(duì)FAS和ACC蛋白含量產(chǎn)生顯著影響，但是DEX會(huì)顯著提高ATGL蛋白表達(dá)量。在腹脂中，同樣胰島素、DEX都不能影響FAS和ACC蛋白含量，但是二者都能顯著增加ATGL蛋白含量。脂肪沉積方面，胰島素與DEX都能顯著促進(jìn)脂肪沉積，在腹脂，僅DEX能促進(jìn)脂肪生成。
　　(4)克隆了鴨