成骨細胞分化過程中相關(guān)基因的表達.pdf

1、目的:
　　 在骨形成這個復(fù)雜的過程中，間充質(zhì)細胞分化為成骨細胞，同時分泌胞外基質(zhì)，成骨細胞經(jīng)過胞外基質(zhì)的鈣化及其進一步礦化，被包埋在骨質(zhì)中而形成骨細胞。間充質(zhì)細胞的成骨分化過程可簡要的總結(jié)為以下幾個階段:間充質(zhì)干細胞→骨祖細胞→前成骨細胞→成熟成骨細胞→骨細胞。有研究表明，成熟的成骨細胞可分泌DMP1、ALP、PHEX、Sclerostin來調(diào)節(jié)成骨分化的整個過程。然而目前仍缺乏關(guān)于其對成骨分化過程的具體調(diào)節(jié)作用的研究。

2、>　　 本研究是對MC3T3-E1細胞系進行體外成骨誘導(dǎo)，應(yīng)用實時定量RT-PCR檢測在成骨分化過程中，成骨細胞內(nèi)的DMP1mRNA、ALP mRNA、PHEX mRNA、SOST mRNA表達量的變化，為進一步闡明成骨細胞在成骨分化中的調(diào)節(jié)作用提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 用成骨誘導(dǎo)液分別對MC3T3-E1細胞誘導(dǎo)0天、7天、14天、21天、35天，在每個時間點觀察細胞礦化結(jié)節(jié)形成情況，并用QIAGEN試劑盒提

3、取總RNA，將總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，然后用DMP1、ALP、PHEX、SOST引物進行實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)(Real-time fluorescence quantitative PCR，RFQ-PCR)實驗，檢測各個時間點DMP1、ALP、PHEX、SOST基因的mRNA表達情況。
　　 結(jié)果:
　　 隨著MC3T3-E1細胞成骨誘導(dǎo)時間的增加，細胞數(shù)目增長趨勢明顯減慢，礦化結(jié)節(jié)逐漸變大、數(shù)量逐漸增加;

4、>　　 隨著誘導(dǎo)時間的增加，DMP1mRNA、PHEX mRNA、SOST mRNA的表達逐漸升高，第35天達到最高，其中SOST mRNA的表達增加量最大;ALP mRNA表達逐漸降低，第35天達到最低。
　　 結(jié)論:
　　 1.在成骨誘導(dǎo)液作用下，成骨細胞向骨細胞分化，表現(xiàn)出了骨細胞的一些基因表達特性。
　　 2.成骨細胞在成骨分化過程中，細胞內(nèi)與成骨作用有關(guān)基因的表達量發(fā)生顯著變化，其中DMP1mRNA、