PHBHHx對成骨細(xì)胞增殖及其生物活性相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　 研究PHBHHx對大鼠成骨細(xì)胞的Cbfal和OCN表達(dá)變化的影響,探討PHBHHx作為醫(yī)用材料的可行性,促進(jìn)PHBHHx在臨床的早日應(yīng)用。
　　 方法:
　　 1、實(shí)驗分組
　　 實(shí)驗組:PHBHHx或PHBHHx制備的浸提液:對照組:玉米造PLA或PLA制備的浸提液:陰性對照組:單純培養(yǎng)液。
　　 2、PHBHHx的制備。
　　 3、大鼠成骨細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定。
　　

2、 4、掃描電鏡觀察材料表面成骨細(xì)胞的生長情況。
　　 5、MTT細(xì)胞毒性實(shí)驗。
　　 6、材料表面的細(xì)胞堿性磷酸酶活性檢測。
　　 7、Real-timePCR檢測材料上成骨細(xì)胞的Cbfal和OCN的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:
　　 1、實(shí)驗材料
　　 PHBHHx在培養(yǎng)皿中外觀為半透明,對照組玉米造PLA在培養(yǎng)皿中外觀為全透明。掃描電鏡觀察見PHBHHx表面粗糙,有很多顆粒狀物質(zhì)形成。PL

3、A表面光滑,與PHBHHx相比較要顯細(xì)膩。
　　 2、成骨細(xì)胞培養(yǎng)與鑒定
　　 細(xì)胞多呈梭形或多角形,細(xì)胞內(nèi)部出現(xiàn)黑色點(diǎn)狀分泌物。ALP細(xì)胞化學(xué)顯色呈陽性,可見胞質(zhì)中紫色顆粒I型膠原免疫熒光染色見I型膠原在細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)分布:茜素紅染色可見紅染的鈣化結(jié)節(jié)。
　　 3、細(xì)胞與材料的黏附
　　 掃描電鏡下PHBHHx及PLA表面生長的細(xì)胞數(shù)量均隨著接種時間的延長而逐漸增多,且細(xì)胞在兩種材料的表面均伸展成梭形或多角

4、形。培養(yǎng)第48h,可見PHBHHx材料表面的細(xì)胞明顯多于PLA表面的細(xì)胞。
　　 4、MTT檢測
　　 除純培養(yǎng)液組外,實(shí)驗組和對照組的OD值均隨培養(yǎng)時間延長而增加。在各培養(yǎng)時間段,PHBHHx組與PLA組的OD值之間均沒有顯著差異:但在培養(yǎng)第48h,PHBHHx組和PLA組的OD值均明顯高于純培養(yǎng)液組。
　　 5、ALP檢測
　　 3組細(xì)胞的ALP活性均隨培養(yǎng)時間延長而增加。在培養(yǎng)12h和24h,3組之

5、間均沒有顯著差異:在培養(yǎng)48h后,PHBHHx組和PLA組之間沒有顯著差異,但PHBHHx組與純培養(yǎng)液組以及PLA組與純培養(yǎng)液組之間均有顯著性差異(p＜O.05)。
　　 6、Real-timePCR檢測
　　 PLA組的cbfal和OCN隨著培養(yǎng)時間的延長,呈持續(xù)性下降趨勢。而PHBHHx組雖然也出現(xiàn)了下降,但其總體表現(xiàn)較為平緩。
　　 結(jié)論:
　　 1、PHBHHx和玉米造PLA.對成骨細(xì)胞的黏附作用