細(xì)胞外鈣離子對(duì)成骨細(xì)胞增殖的影響及其機(jī)制研究.pdf_第1頁(yè)
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1、成骨細(xì)胞是起源于多能的骨髓間質(zhì)的基質(zhì)細(xì)胞,能夠增殖分化,形成骨細(xì)胞,并分泌骨質(zhì),是參與骨重建的重要細(xì)胞之一。細(xì)胞外鈣離子濃度([Ca2+]o)的升高可以誘導(dǎo)骨的形成。為了研究其機(jī)制,本文首先利用MTT比色的方法和Hoechst33342法檢測(cè)在不同細(xì)胞[Ca2+]o作用下,成骨細(xì)胞增殖和凋亡的情況。由于細(xì)胞增殖和凋亡與細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度([Ca2+]i)的變化有著重要的聯(lián)系,所以本文接著利用單細(xì)胞鈣離子熒光成像技術(shù)檢測(cè)成骨細(xì)胞[Ca2+]

2、o對(duì)于細(xì)胞[Ca2+]i變化的影響,并分析了細(xì)胞內(nèi)鈣離子變化的機(jī)制。
   通過(guò)用MTT比色法證明:分別用含5mM、10mM、20mM、40mM鈣離子濃度培養(yǎng)基的培養(yǎng),成骨細(xì)胞活力增加的比率分別為19.52%、18.64%、-17.96%、-37.19%。通過(guò)用Hoechst33342法證明,成骨細(xì)胞在含有40mM等高濃度鈣離子培養(yǎng)基培養(yǎng)下細(xì)胞活力降低系細(xì)胞凋亡所致。
   單細(xì)胞鈣熒光成像實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:1、終濃度為5m

3、M、10mM、20mM、40mM的細(xì)胞外鈣離子都能夠引起成骨細(xì)胞[Ca2+]i的升高。并且細(xì)胞[Ca2+]o越高,引起細(xì)胞[Ca2+]i升高的幅度越大。2、在加入細(xì)胞[Ca2+]o刺激初始階段,尤其是在20mM、40mM濃度組的實(shí)驗(yàn)中,細(xì)胞[Ca2+]i有一個(gè)明顯的短暫而迅速的上升的過(guò)程(第一上升階段),接著進(jìn)入一個(gè)持續(xù)升高的過(guò)程(第二上升階段)。TMB-8(一種胞內(nèi)鈣釋放的抑制劑)可使第一上升階段細(xì)胞[Ca2+]i上升速度明顯變緩,第

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