版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、目的:建立肺炎衣原體(C.pn)體外感染血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC)的模型;觀察C.pn在VEC中的發(fā)育周期及細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化;觀察黃連素對C.pn感染誘導(dǎo)的VEC遷移及血管新生的干預(yù)作用,初步探討其相關(guān)分子機(jī)制。
方法:
1.利用HEp-2細(xì)胞體外增殖培養(yǎng)C.pn AR-39株,用純化的C.pn感染VEC,光鏡下觀察細(xì)胞病變,PCR鑒定c.pn DNA特異性片段,確定C.pn感染VEC成功;
2.吖
2、啶橙(AO)染色熒光顯微鏡下觀察感染24 h、48 h和72 h后,VEC內(nèi)C.pn包涵體狀態(tài);
3.透射電鏡下觀察感染24 h、48 h和72 h后,C.pn包涵體與VEC的超微結(jié)構(gòu)變化;
4.應(yīng)用Wound-healing實(shí)驗(yàn)觀察C.pn感染的VEC于二維水平上的遷移變化情況,及不同濃度黃連素對其干預(yù)作用;
5.應(yīng)用Transwdl實(shí)驗(yàn)觀察C.pn感染的VEC于三維水平上的遷移變化情況,及不
3、同濃度黃連素對其干預(yù)作用;
6.應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測C.pn感染的VEC MMP-1、MMP-9的分泌水平,及不同濃度黃連素對其干預(yù)作用;
7.應(yīng)用Capillary tube formation實(shí)驗(yàn)觀察C.pn感染的VEC形成新生血管能力的變化,及不同濃度黃連素對其干預(yù)作用;
8.應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測C.pn感染后,VEC胞內(nèi)信號蛋白P13KmRNA表達(dá)水平的變化,及不同濃度黃連素對其
4、影響;
9.應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測C.pn感染后,VEC胞內(nèi)信號蛋白P13K酶活性水平的變化,及不同濃度黃連素對其影響。
結(jié)果:
1.光學(xué)顯微鏡下可見,C.pn感染后的VEC內(nèi)有空泡狀C.pn包涵體,PCR鑒定獲得C.pnDNA特異性片段,C.pn感染VEC模型成功建立;
2.AO染色熒光顯微鏡下可見,C.pn感染24 h后,VEC胞內(nèi)可見C.pn包涵體;感染48 h后,VEC胞內(nèi)
5、C.pn包涵體數(shù)量增加;感染72 h后,VEC崩解壞死,C.pn包涵體開始釋放至胞外;
3.透射電鏡下可見,感染24 h后,VEC內(nèi)出現(xiàn)C.pn包涵體;感染48 h后,胞內(nèi)出現(xiàn)大量含電子致密物的C.pn原體,及呈膜泡樣的C.pn網(wǎng)狀體等C.pn特征性超微結(jié)構(gòu),VEC粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張;感染72 h后,C.pn包涵體明顯增多,VEC崩解壞死,C.pn包涵體開始釋放至胞外;
4.C.vn感染24 h、48 h和72
6、h后,二維水平上感染組VEC遷移能力均明顯增強(qiáng),呈時(shí)間依賴性;P13K特異性抑制劑LY294002處理組VEC遷移能力明顯減弱;中、高劑量黃連素對C.pn感染誘導(dǎo)的VEC遷移具有明顯抑制作用,呈濃度依賴性;
5.C.pn感染72 h后,三維水平上感染組VEC遷移能力明顯增強(qiáng),LY294002組VEC遷移能力明顯減弱,低、中、高劑量黃連素對C.pn感染誘導(dǎo)的VEC遷移均有明顯抑制作用,且隨著濃度升高抑制作用增強(qiáng),呈濃度依賴性
7、;
6.C.pn感染24h、48 h和72h后,MMP-1、MMP-9分泌水平均無顯著性差異,LY294002及各劑量黃連素均未使兩者分泌水平明顯改變;
7.C.pn感染72 h后,VEC形成微管腔結(jié)構(gòu)的能力明顯增強(qiáng),LY294002可使之減弱,低、中、高劑量黃連素對C.pn感染誘導(dǎo)的微管腔形成均有明顯抑制作用,且隨著濃度升高抑制作用增強(qiáng),呈劑量依賴性;
8.C.pn感染72h后,P13KmRN
8、A表達(dá)水平顯著升高,酶活性亦明顯增強(qiáng);LY294002可使其表達(dá)水平降低,酶活性減弱;中、高劑量黃連素可使C.pn感染后P13K mRNA表達(dá)水平與酶活性均明顯降低;VEC遷移、微管腔形成的程度與P13K mRNA表達(dá)水平(r1,r2)、酶活性(r1’,r2’)均呈正相關(guān)。
結(jié)論:C.pn感染可能是通過激活P13K誘導(dǎo)VEC遷移進(jìn)而促進(jìn)血管新生,而并非通過MMP-1、MMP-9的基質(zhì)降解途徑;黃連素可拮抗C.pn感染誘導(dǎo)的
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- IQGAP1-N-WASP信號通路在肺炎衣原體感染促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移及血管新生中的調(diào)控作用.pdf
- 轉(zhuǎn)錄相關(guān)增強(qiáng)子-1保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞衰老和肺炎衣原體擾亂血管內(nèi)皮細(xì)胞脂質(zhì)代謝的研究.pdf
- 蜂膠對血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響及其分子機(jī)制.pdf
- 新生隱球菌感染腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)單核細(xì)胞遷移的研究.pdf
- 血管緊張素Ⅱ在血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬中的作用及其機(jī)制.pdf
- TLR2在肺炎衣原體感染誘導(dǎo)血管平?jīng)]肌細(xì)胞遷移中的作用.pdf
- GLP-1對AGEs誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的拮抗作用及機(jī)制研究.pdf
- 血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞血管生成的作用及機(jī)制研究.pdf
- 杜鵑素對氧化應(yīng)激誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及分子機(jī)制研究.pdf
- 葛根素對血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf
- 肺炎衣原體感染與血管內(nèi)皮功能變化關(guān)系的臨床探討.pdf
- 黃連解毒湯對中性粒細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附的影響及其分子機(jī)制研究.pdf
- 葛根素拮抗高糖對血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的作用研究.pdf
- 血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子-2(ECSM2)對血管新生作用的研究.pdf
- 血管緊張素-(1-7)對血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞E-選擇素表達(dá)的影響及其機(jī)制研究.pdf
- 血管緊張素Ⅱ?qū)ρ軆?nèi)皮細(xì)胞自噬的影響及其機(jī)制的初步研究.pdf
- IQGAP1在肺炎衣原體感染誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞粘附和遷移中的作用.pdf
- Exenatide對高糖誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及相關(guān)機(jī)制.pdf
- 肝細(xì)胞生長因子對血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移的影響及其相關(guān)機(jī)制的研究.pdf
- 加減一陰煎對血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用及其機(jī)制.pdf
評論
0/150
提交評論