葛根素對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、葛根素是從傳統(tǒng)中藥葛根中提取的一種異黃酮，具有抗炎、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗氧化、降血糖、降血壓、降血脂等多種藥理活性，廣泛用于糖尿病及心血管病的預(yù)防和治療。表觀遺傳學(xué)相關(guān)的組蛋白甲基化作為基因表達(dá)的調(diào)控者，直接參與了糖尿病血管內(nèi)皮細(xì)胞炎性損傷的過程，成為糖尿病血管病發(fā)生的一個(gè)基本的機(jī)制和防治的新途徑。
　　本文采用高糖體外培養(yǎng)人血管內(nèi)皮細(xì)胞模擬糖尿病時(shí)血管內(nèi)皮細(xì)胞所處的高血糖環(huán)境，加入葛根素進(jìn)行干預(yù)，利用RT-PCR技術(shù)檢測細(xì)胞中與血

2、管功能和血管炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，進(jìn)一步采用染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)檢測細(xì)胞中內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)和單核細(xì)胞趨化蛋白(monocyte chemotactic protein-1，MCP-1)基因啟動(dòng)子區(qū)的組蛋白甲基化。
　　結(jié)果表明，高糖導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞中eNOS和MCP-1基因表達(dá)的增加與啟動(dòng)子區(qū)域的H3K4me2和H3K4me3甲基化增強(qiáng)以及與H3K9me

3、1甲基化減弱有關(guān)。葛根素能夠逆轉(zhuǎn)高糖導(dǎo)致的eNOS和MCP-1基因啟動(dòng)子區(qū)H3K4me2和H3K4me3甲基化改變但不能逆轉(zhuǎn)H3K9me1甲基化的改變。此外還發(fā)現(xiàn)，葛根素對(duì)高糖導(dǎo)致的eNOS和MCP-1基因啟動(dòng)子區(qū)的H3K4me2和H3K4me3甲基化水平的逆轉(zhuǎn)與組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶SET7/9、MLL和menin以及組蛋白去甲基化酶LSD1有關(guān)。
　　糖尿病常伴有慢性炎癥，炎癥導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷也是糖尿病血管并發(fā)癥發(fā)生和發(fā)展的一個(gè)重要

4、原因。本文采用炎癥因子TNFα作用于體外培養(yǎng)的人血管內(nèi)皮細(xì)胞模擬糖尿病血管病發(fā)生時(shí)血管內(nèi)皮細(xì)胞所處的炎癥環(huán)境，并加入葛根素進(jìn)行干預(yù)，采用ELISA和RT-PCR方法檢測MCP-1蛋白的分泌和基因的表達(dá)，采用促分裂素原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPK)和核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)信號(hào)通路抑制劑尋找葛根素可能參與調(diào)控的信號(hào)通路，利用Wester

5、n blot方法檢測葛根素改善TNFα誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞MCP-1表達(dá)的信號(hào)調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　結(jié)果表明，葛根素抑制了TNFα誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞MCP-1蛋白的分泌和mRNA的表達(dá)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)葛根素對(duì)MCP-1表達(dá)的抑制與其對(duì)MAPK和NF-κB信號(hào)通路的的抑制有關(guān)。
　　以上研究結(jié)果表明:葛根素能夠保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞免受高糖所引起的損傷，其機(jī)制與葛根素對(duì)基因啟動(dòng)子區(qū)組蛋白甲基化的影響有關(guān);葛根素還能保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞免受TNF