血管緊張素Ⅱ?qū)ρ軆?nèi)皮細(xì)胞自噬的影響及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、研究背景:血管內(nèi)皮功能障礙與高血壓病的發(fā)生密切相關(guān),血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)是造成血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的一個(gè)重要因素,自噬是一種細(xì)胞應(yīng)對(duì)損傷的保護(hù)性反應(yīng),而迄今對(duì)高血壓病理過(guò)程中血管內(nèi)皮細(xì)胞中自噬的作用仍知之甚少。在AngⅡ引發(fā)損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞中,我們推測(cè)自噬可能是防止血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的一種潛在機(jī)制。因此,本研究通過(guò)觀察AngⅡ?qū)ρ軆?nèi)皮細(xì)胞自噬的影響,并初步探討AngⅡ誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬的可能機(jī)制,為高血壓病的有效防治提供新思路。

2、r>　　研究目的:研究血管緊張素Ⅱ?qū)ρ軆?nèi)皮細(xì)胞自噬的影響,并初步探討血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生自噬的可能機(jī)制。
　　研究方法:以EA.hy926血管內(nèi)皮細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象,CCK8法檢測(cè)10-8、10-7、10-6mol/L的AngⅡ作用24h后對(duì)EA細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,利用熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)AngⅡ(10-7mol/L)、AngⅡ聯(lián)合N-乙酰半胱氨酸(NAC,50μmol/L)作用24h后細(xì)胞中ROS生成量;然后固定濃度為10

3、-7mol/L的AngⅡ處理不同時(shí)間(0h、6h、12h、24h、36h)后或不同濃度(10-8、10-7、10-6mol/L)的AngⅡ處理24h,通過(guò)Westernblotting分析LC3-Ⅱ蛋白變化以及吖啶橙(AO)染色后通過(guò)熒光顯微鏡下觀察胞漿中自噬體形成的情況來(lái)判斷血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬的發(fā)生情況;AngⅡ(10-7mol/L)聯(lián)合自噬的抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-MA,2mmol/L)、N-乙酰半胱氨酸(NAC,50μmol/L)

4、或纈沙坦(Valsartan,20μmol/L)處理24h后使用相同方法檢測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬的發(fā)生情況。
　　研究結(jié)果:EA.hy926血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)過(guò)AngⅡ刺激后胞內(nèi)ROS生成量顯著增加(P<0.05),LC3-Ⅱ蛋白的表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.05),自噬體的形成明顯增加;3-MA、NAC或Valsartan可以明顯抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞中AngⅡ所誘導(dǎo)的LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)(P<0.05)及自噬體的形成。
　　研究結(jié)論:AngⅡ