血管緊張素-（1-7）對脂多糖誘導血管內(nèi)皮細胞組織因子表達的影響及機制研究.pdf

1、生理性止血反應的凝血過程和病理性血栓形成過程均是通過組織因子途徑實現(xiàn)的。組織因子(TF)是一種分子量為47 kD的單鏈跨膜糖蛋白，由263個氨基酸殘基組成。它既是FⅦ與FⅦa的受體，又是FⅦa催化活性的輔因子。組織因子途徑是指由TF啟動的凝血過程，當TF與FⅦa結(jié)合后，在Ca2+與磷脂存在條件下對FⅩ和FⅨ的激活。 脂多糖(LPS)是組成革蘭氏陰性菌(G)外壁的一種復合糖脂，具有廣泛的生物學作用。已知LPS可引起發(fā)熱反應、白細胞

2、數(shù)目改變、彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)和休克等。LPS是誘導產(chǎn)生炎癥介質(zhì)的最有效刺激物，它能刺激血管內(nèi)皮細胞(VEC)產(chǎn)生炎癥因子如腫瘤壞死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1α、IL-1β和IL-6等；同時也能直接和/或間接刺激VEC產(chǎn)生TF、粘附因子和生長因子等。 腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)是人體內(nèi)最重要的調(diào)節(jié)系統(tǒng)之一，在維持人正常組織功能和疾病，尤其是心腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展中都起了重要作用。近來許多研究顯示該系統(tǒng)中的新

3、成員血管緊張素-(1-7)[Ang-(1-7)]是在血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)2作用下由AngⅠ或AngⅡ生成的一個含有7個氨基酸殘基的多肽，在體內(nèi)發(fā)揮著舒張血管，調(diào)節(jié)水電解質(zhì)平衡和抑制細胞增殖等作用。但Ang-(1-7)是否能夠抑制LPS在促進血栓形成方面的作用，能否通過抑制TF的升高進而降低血栓性疾病的發(fā)生以及其具體機制至今尚未見報道。 研究目的: ①觀察LPS對人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞株(HUVECs)TF表達的影響以

4、及Ang-(1-7)對其的干預作用； ②探討Ang-(1-7)抑制LPS誘導HUVECs TF表達的作用機制。 方法：HUVECs的培養(yǎng)采用DMEM完全培養(yǎng)基；MTT法測細胞活力；一期凝固法測總的細胞促凝活性；EIASA法測TF抗原；RT-PCR的方法檢測TF mRNA；免疫熒光化學觀察NF-κB的變化。 結(jié)果: ①與對照組相比，不同濃度的LPS(0.01～100 mg/L)能呈劑量依從性地促進HUVEC

5、s促凝活性(PCA)和TF mRNA增加(r=0.963)，在10 mg/L達到峰值； ②單用Ang-(1-7)(10-8～10-5mol/L)對HUVECs PCA沒有影響。但在給予LPS之前30 min用Ang-(1-7)(10-8～10-5mol/L)預處理HUVECs，LPS(10 mg/L)刺激HUVECs表達TF的作用明顯受抑制，并存在顯著量效關(guān)系(r=-0.947)，在10-6mol/L時其抑制作用最強。10-6m

6、ol/L的Ang-(1-7)抑制LPS(10mg/L)對TF表達的刺激作用也呈時間依賴性，在8 h抑制作用最強。 ③一氧化氮合酶(NOS)抑制劑L-NAME可明顯地阻抑Ang-(1-7)拮抗LPS促進HUVECs PCA和TF mRNA增加的作用。 ④免疫熒光化學染色發(fā)現(xiàn)LPS作用45min可引起HUVECs內(nèi)NF-κB從胞漿移入核內(nèi)；Ang-(1-7)預處理15min則可部分抑制LPS引起的HUVECs內(nèi)NF-κB的轉(zhuǎn)