腫瘤壞死因子α和血管緊張素Ⅱ?qū)ρ軆?nèi)皮細(xì)胞組織因子表達(dá)及轉(zhuǎn)錄調(diào)控的影響.pdf

1、中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文腫瘤壞死因子α和血管緊張素Ⅱ?qū)ρ軆?nèi)皮細(xì)胞組織因子表達(dá)及轉(zhuǎn)錄調(diào)控的影響姓名：高詠梅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：朱廣瑾2000.4.1中國(guó)協(xié)和氍科大學(xué)博士生論文瓚忒調(diào)控元{ 孛結(jié)含活洼豹影稠。6 ) C 分+ 在5 ’上游凈歹l 調(diào)攘T N F a 、A n g { 1 分剮誘母血管內(nèi)皮細(xì)胞T F 基因轉(zhuǎn)錄中的作用。研究緒果如下；1 ) 采用細(xì)胞發(fā)色底蚴測(cè)定法分別觀察到不同濃度T N F a 、

2、A n g l I 均可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞表面T F 活性增強(qiáng)，T N F n ( 1 O O U ／m 1 ) 及A n g I I ( 1 0 - 6 m o ] ／L ) 誘導(dǎo)T F 活性逡熱具壽熬著蛙鬈義謬固。0 5 ) ；2 ) 逆轉(zhuǎn)錄．多聚酶鏈反應(yīng)( R T - P C R ) 法表明，上述濃度T N F q 、A n g I I 對(duì)血管爨皮餐穩(wěn)幫基囂m R N A 熬襲這均鴦鍵逶露溪，T F m R N A 表達(dá)量分麓戈黯熬秘4

3、 ．6 7 倍和2 ．7 5 倍。細(xì)胞原餓雜交實(shí)驗(yàn)亦得到類似結(jié)果。3 ) 本工作首次確定在T F 基因5 ’上游1 | 警歹j j ．2 4 4 ，一H l b p 范圍內(nèi)存在T N F d 、A n g I I 誘導(dǎo)反應(yīng)的順式調(diào)控元件，而且7 6 4 3 的抑制作用可自％依賴T F 基因上游序列，2 4 4 # 1 l l b p 的存在。采用基因羹組技術(shù)，成功構(gòu)建了兩種含入T F 基因不同上游序到的熒斃素酶攝蠹基霾質(zhì)粒p - 2 4

4、 4 b t g + 1 2 1 b p L u e 襄P - 1 1 1 ／+ 1 2 1 鼯L u c ，磐轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞，用報(bào)錯(cuò)基因檢測(cè)技術(shù)觀測(cè)到，在盯基因上游序列-2 4 4 b p t + 1 2 1 b p 存煮下，T N F a 、A n g I I 霹筏轉(zhuǎn)染肉瘦餐藏茨兜素臻表這耋鞠顯增加，7 6 4 3 能明戥地抑制其增加；在上游序列- 1 1 1 b p 一1 2 1 b p 存在下，轉(zhuǎn)染內(nèi)皮細(xì)胞熒光豢酶表達(dá)量顯著

5、降低，靜忭a 、A n g I I 藏7 6 4 3 楚毽與對(duì)照無(wú)明顯差異。4 、W e s t e r n 印逑雜交的方法梭測(cè)至I T N Fq 、A n g I I 可使內(nèi)皮細(xì)胞核內(nèi)N F ·心含蠹增加。T N F a 、A n g l l 處理聰N F - 1 c B 禽量分剮為對(duì)照的I ．7 7 倍和1 ．5 2 倍。這表明T N F a 、A n g l l 均§§夠增掇盤(pán)警內(nèi)皮繃胞轉(zhuǎn)蒙因子N F

6、 —K B 的拔轉(zhuǎn)蹙t5 ) 采用電泳遷移率改變法( E M S A ) 觀察到T N F d 、A n g I I 可使內(nèi)皮細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子N F ．遺每穗痘D N A 竅烈縫會(huì)溪建瑾強(qiáng)。烈F a 處理愛(ài)潦一娼姆疆應(yīng)D N A 序列結(jié)合活性增強(qiáng)，勾通用、特異N F —K B 探針結(jié)合活性分別為對(duì)照的6 ．7 6 倍取2 ．0 7 倍；A n g I I 姓理屠N F 柚寫(xiě)相應(yīng)漲A 穿翻結(jié)合活瞧芬增強(qiáng)，每逶搦、特異N F ．心探針結(jié)合活性