腫瘤壞死因子受體基因轉(zhuǎn)移增強新型腫瘤壞死因子對血管內(nèi)皮細(xì)胞殺傷作用的實驗研究.pdf

1、山東大學(xué)博士學(xué)位論文腫瘤壞死因子受體基因轉(zhuǎn)移增強新型腫瘤壞死因子對血管內(nèi)皮細(xì)胞殺傷作用的實驗研究姓名：孫曉文申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：泌尿外科指導(dǎo)教師：許純孝2001.4.18腫瘤壞死因子受體基因轉(zhuǎn)移增強新型腫瘤壞死園子對血管內(nèi)皮細(xì)胞殺傷作用的實驗研究腫瘤組織特別是實體腫瘤在生長過程中，' - 3 其直徑超過2 毫米時，必須有新生血管生成為其提供生長所需的營養(yǎng)，因此腫瘤快速生長擴展的一個必要條件就是大量新生血管的生成。有許多觀察和

2、實驗已經(jīng)證明，腫瘤組織中的新生血管密度高于良性增生組織和正常組織。血管內(nèi)皮細(xì)胞在正常的生理條件下是處于相對靜止?fàn)顟B(tài)的，只有在創(chuàng)傷修復(fù)、月經(jīng)等過程中才有新血管的生成。因此，正常人體組織與腫瘤組織的區(qū)別之一就是腫瘤組織中有大量新生血管，破壞或殺傷新生血管可抑制腫瘤。有實驗證明，將免疫毒素向瘤內(nèi)注射后，造成腫瘤血管阻塞，抑制了腫瘤的成長。故新生血管成為腫瘤基因治療的很好的靶組織。眾所周知，新生血借是由不斷分裂的內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的，如果能夠抑制或根

3、本阻斷內(nèi)皮細(xì)胞在腫瘤組織中的分裂，就能夠抑制或阻斷新生血管的生成，腫瘤細(xì)胞得不到必要的營養(yǎng)，也就不能生長擴展?；谏鲜隼碚摶A(chǔ)，I ‘本研究擬通過改造基因治療中常用的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體p L X S N ，構(gòu)建能使目的基因( T N F R ) 在目的細(xì)胞中特異表達(dá)的病毒載體，利用基因轉(zhuǎn)移的方法，實現(xiàn)T N F R 在目的細(xì)胞一一血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的特異表達(dá)，從而提高特定細(xì)胞表面T N F R 的表達(dá)數(shù)量，增強T N F 對血管內(nèi)皮細(xì)胞的殺傷

4、作用。f 材料與方法 質(zhì)粒p B l u e s c r i p t —K D R p —T N F 旺D 1 l a 和p L x s N D 2 9 9 一K D R p —T N F o cD 1 l a ( 含有編碼血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體K D R 的啟動子K D R p 的c I ) N A 序列) ，p u t l 8 - T N F R 5 5 和p U C l 8 一T N F R 7 5 ( 分別含有編碼腫瘤壞死因子

5、受體T N F R 5 5 和T N F R 7 5 的c D N A序列) 由空軍總醫(yī)院分子生物學(xué)研究中心構(gòu)建并保存。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體p L X S N 、大腸桿菌菌株E c o l i ．D H 5 o 【A m p 一購于I n v i t r o g e n 公司。P A 3 17 逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞系、N I H 3 T 3 鼠成纖維細(xì)胞系、E C V 3 0 4 血管內(nèi)皮細(xì)胞系購自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院，空軍總醫(yī)院分子生物學(xué)研究中心保