SelS對(duì)腫瘤壞死因子-α誘導(dǎo)的血管鈣化的影響.pdf

1、血管鈣化是動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病、慢性腎病等多種疾病的病理特征。血管鈣化形成的一個(gè)中心環(huán)節(jié)就是血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)向成骨細(xì)胞分化。炎癥細(xì)胞因子如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)能誘導(dǎo)VSMCs向成骨細(xì)胞分化,促進(jìn)血管鈣化。硒是哺乳動(dòng)物所必需的一種微量元素,它在生物體中以硒蛋白的形式發(fā)揮生理作用。SelS是硒蛋白家族中的一員,已有研究表明,SelS能夠參與炎癥調(diào)節(jié)。我們采用?-甘油磷酸鈉誘導(dǎo)VSMCs體外鈣化,初步探究了SelS、炎癥

2、、血管鈣化之間的關(guān)系,取得了如下結(jié)果:
　　1.通過(guò)RT-PCR和蛋白質(zhì)印跡技術(shù)初步探索了大鼠SelS基因的有效沉默片段。經(jīng)過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)探索,初步的結(jié)論為:在所設(shè)計(jì)的五條siRNA片段中,編號(hào)為siRNA-148沉默效果最佳,其序列為:Sense:5’-GCGUCCUUCUCUACAUUGUTT-3’;Antisense:5’-ACAAUGUAGAGAAGGACGCTT-3’。
　　2.初步數(shù)據(jù)顯示,SelS沉默后,鈣化的V

3、SMCs的ALP活性降低,鈣化標(biāo)志蛋白cbfa-1、ColI基因表達(dá)下降,但基質(zhì)鈣沉積增加。這些結(jié)果表明SelS可能有抑制血管鈣化的作用,但其作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究。
　　3.與先前文獻(xiàn)報(bào)道一致,我們研究發(fā)現(xiàn),TNF-α能夠增強(qiáng)鈣化VSMCs中ALP活性及cbfal的表達(dá),表明TNF-α在體外促進(jìn)VSMCs向成骨細(xì)胞分化。
　　4.用siRNA-148片段使SelS基因沉默后,TNF-α促進(jìn)VSMCs向成骨細(xì)胞分化作用減弱,

4、表現(xiàn)為ALP活性及cbfal的表達(dá)均顯著下降。但是,通過(guò)對(duì)基質(zhì)鈣含量的測(cè)定發(fā)現(xiàn),SelS基因沉默使TNF-α促進(jìn)鈣化的能力進(jìn)一步增加,表明SelS可以抑制TNF-α誘導(dǎo)的鈣化。這只是初步結(jié)果,還需要大量的實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)。
　　5.將鈣化的VSMCs用亞硒酸鈉預(yù)處理24h,再用TNF-α作用細(xì)胞。發(fā)現(xiàn)亞硒酸鈉能夠抑制TNF-α誘導(dǎo)的ALP活性的增強(qiáng),并且100nmol/L的亞硒酸鈉效果最為顯著。這表明亞硒酸鈉可能能夠抑制TNF-α誘