肥大細(xì)胞蛋白酶激活受體表達(dá)及功能初探.pdf

1、蛋白酶激活受體(protease activated receptors,PARs)是絲氨酸蛋白酶受體,目前在人和小鼠體內(nèi)共發(fā)現(xiàn)了四種PARs,分別為PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4。它們的基因序列于1991、1994、1997和1998年被先后克隆出來(lái)。其中PAR-1是凝血酶和胰蛋白酶的受體,PAR-2是胰蛋白酶、類胰蛋白酶和彈性蛋白酶的受體,PAR-3是凝血酶受體,PAR-4是凝血酶和胰蛋白酶受體。
　　 很久

2、以來(lái)就認(rèn)識(shí)到肥大細(xì)胞分泌介質(zhì)參與過(guò)敏反應(yīng)。作為初級(jí)效應(yīng)細(xì)胞,肥大細(xì)胞既參與急性過(guò)敏反應(yīng)又參與慢性過(guò)敏反應(yīng)。肥大細(xì)胞一旦被激活,即釋放其已預(yù)先合成的和新產(chǎn)生的介質(zhì)執(zhí)行其生物學(xué)功能。這些介質(zhì)包括組胺、肝素、蛋白酶以及一系列的細(xì)胞因子如IL-4、IL-5和IL-6等,這些細(xì)胞因子可以在生理和病理情況下參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分泌和遷移等。
　　 有關(guān)PARs與過(guò)敏反應(yīng)性疾病的研究發(fā)現(xiàn),PARs尤其是PAR-2與過(guò)敏反應(yīng)密切相關(guān)。一些過(guò)敏原

3、如塵螨、蟑螂過(guò)敏原可以激活PAR-2。但通過(guò)疾病動(dòng)物模型得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果卻不盡相同:有些結(jié)果顯示PAR-2激活引起呼吸道的過(guò)敏性炎癥反應(yīng),有些則發(fā)現(xiàn)PAR-2的激活在過(guò)敏性疾病中起到保護(hù)作用。所以有待于進(jìn)一步深入探討PARs在過(guò)敏反應(yīng)性疾病中的作用。雖然對(duì)于參與過(guò)敏反應(yīng)的一些細(xì)胞如內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等的PARs功能已經(jīng)有所了解,然而對(duì)過(guò)敏性疾病的核心效應(yīng)細(xì)胞-肥大細(xì)胞的PARs功能還知之甚少。因此本研究將進(jìn)

4、一步的探討肥大細(xì)胞PARs的功能,為過(guò)敏性疾病發(fā)病機(jī)制的研究提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　 一、蛋白酶激活受體在肥大細(xì)胞的表達(dá)
　　 用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、流式細(xì)胞術(shù)及免疫熒光細(xì)胞染色分析方法,在mRNA水平和蛋白水平檢測(cè)PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4在小鼠肥大細(xì)胞MC/9和P815的表達(dá)。結(jié)果 小鼠肥大細(xì)胞MC/9和P815在mRNA水平和蛋白水平均表達(dá)PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4。結(jié)論 肥大

5、細(xì)胞MC/9和P815表達(dá)PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4。
　　 二、絲氨酸蛋白酶對(duì)肥大細(xì)胞IL-4分泌的影響
　　 肥大細(xì)胞P815培養(yǎng)后用胰蛋白酶、類胰蛋白酶、凝血酶單獨(dú)或與相應(yīng)抑制劑凝血酶抑制劑、大豆胰蛋白酶抑制劑、α抗胰蛋白酶抑制劑、亮肽素結(jié)合處理肥大細(xì)胞,收集上清并用ELISA方法檢測(cè)IL-4的水平。結(jié)果:胰蛋白酶和類胰蛋白酶能促進(jìn)肥大細(xì)胞P815分泌IL-4明顯增多(P<0.05)；大豆胰蛋白