肥大細胞羧肽酶對類糜蛋白酶促血管生成作用影響的初步研究.pdf

1、[目的]
　　 建立動物海綿移植血管生成模型,利用該模型研究肥大細胞羧肽酶(MC-CP)對類糜蛋白酶(MC-Chy)促血管生成作用的影響。
　　 [方法]
　　 (1)設計特異引物,擴增人MC-Chy的編碼基因,通過酶切、連接,將目的片段插入真核表達質粒pcDNA3.1,構建MC-Chy的分泌性真核表達載體pcDNA3.1/Chy。
　　 (2)分別大量提取人MC-Chy和MC-CP真核表達質粒。

2、　　 (3)將經(jīng)過麻醉后的倉鼠的背部皮膚正中行縱行切口,通過該切口做成頭側與尾側2個皮下囊袋,把聚乙烯醇海綿分別植入每個囊袋內,縫合切口,構建成動物海綿移植血管生成模型。
　　 (4)在建立海綿移植模型的基礎上,在倉鼠皮下移植的海綿塊的周圍部位注射pcDNA3.1/Clay表達質粒。第7天處死倉鼠,取下移植的海綿塊,用剪刀剪殲兩半,一半測定血紅蛋白,另一半進行HE染色和血管內皮細胞的免疫組織化學染色。
　　 (5)用類

3、似的辦法來觀察共轉染MC-CP和MC-Chy質粒對血管形成的影響。術后第1天和第5天,在倉鼠皮下移植的海綿塊的周圍部位同時注射pcDNA3.1/CP和pcDNA3.1/Chy表達質粒,取下海綿塊后分別測定血紅蛋白和血管內皮細胞的免疫組織化學染色。
　　 [結果]
　　 (1)成功構建了pcDNA3.1/Chy表達載體,并大量制備了高純度、無內毒素的人MC-Chy和MC-CP分泌性真核表達質粒。
　　 (2)建立倉

4、鼠海綿移植血管生成模型,用于分析MC-Chy在血管生成中的作用,移植的海綿內的血紅蛋白含量分析顯示,pcDNA3.1/Chy表達質粒處理組的血紅蛋白含量明顯比對照組高;免疫組織化學染色發(fā)現(xiàn)pcDNA3.1/Chy質粒處理組的移植海綿血管密度高于對照組,表明MC-Chy具有促血管生成作用。
　　 (3)在用倉鼠海綿移植模型分析MC-CP對MC-Chy具有促血管生成的影響,移植的海綿內的血紅蛋白含量分析顯示,高濃度pcDNA3.1/

5、CP與pcDNA3.1/Clay表達質粒共轉染組的血紅蛋白含量明顯比只轉染pcDNA3.1/Chy表達質粒組低,而低濃度pcDNA3.1/CP與pcDNA3.1/Chy表達質粒共轉染組和只轉染pcDNA3.1/Chy質粒組相比則沒有顯著差別;免疫組織化學染色發(fā)現(xiàn)高濃度pcDNA3.1/CP與pcDNA3.1/Chy質粒共轉染組的血管密度值比只轉染pcDNA3.1/Chy組低,而低濃度pcDNA3.1/CP與pcDNA3.1/Chy表達共