嬰兒雙歧桿菌對腸易激綜合征小鼠腸道黏膜肥大細胞上CRF受體表達及腸黏膜屏障功能的影響.pdf

1、背景和目的：
　　腸易激綜合征是一種常見但病因尚未明確的功能性胃腸道疾病。其病因很復雜，目前多數(shù)研究者認為應激、腦-腸軸的功能紊亂、腸道屏障功能障礙和局部黏膜免疫應答異常參與腸易激綜合征的發(fā)病。在多種動物模型及人類組織中發(fā)現(xiàn)應激可通過促腎上腺皮質激素釋放因子（CRF，腦-腸軸中重要的效應因子）介導腸屏障功能紊亂。研究表明，CRF通過激活肥大細胞發(fā)揮作用，肥大細胞激活后脫顆粒釋放多種促炎介質如組胺、類胰蛋白酶、腫瘤壞死因子-α等進而

2、影響腸道上皮屏障功能。然而，CRF激活肥大細胞及通過肥大細胞引起腸道屏障功能障礙的機制目前尚未完全闡明。
　　此外，一系列研究已經(jīng)表明腸道菌群與腦-腸軸之間存在著雙向互動即微生物-腦-腸軸。而且應用益生菌可以增強腸道黏膜屏障功能并調節(jié)腸道炎癥反應。然而，在腸易激綜合癥中，腸道微生物如何影響腦-腸軸發(fā)揮作用目前也尚未明確。
　　本實驗通過觀察IBS小鼠模型結腸黏膜肥大細胞上CRF-R1、CRF-R2的表達情況，外周血中組胺、類

3、胰蛋白酶及TNF-α的表達及結腸黏膜CRF、PAR-2、Claudin1-4的表達變化；并應用嬰兒雙歧桿菌對IBS小鼠進行干預，探討并闡明IBS中應激通過肥大細胞引起腸道屏障功能障礙的可能機制并觀察嬰兒雙歧桿菌的調節(jié)作用。
　　材料和方法：
　　30只雄性Balb/c小鼠隨機分為對照組、模型組及嬰兒雙歧桿菌組。以束縛應激法建立 IBS小鼠模型。嬰兒雙歧桿菌組給予嬰兒雙歧桿菌灌胃，而對照組及模型組給予等體積生理鹽水灌胃，連續(xù)1

4、4天。實驗結束后，檢測各組小鼠排便時間、糞便含水量并觀測腹肌收縮反射（AWR）后處死小鼠，留取各組小鼠血清、結腸組織。ELISA檢測外周血中組胺、類胰蛋白酶及TNF-α的表達變化。免疫組織化學分析結腸黏膜CRF、PAR-2、Claudin1、Claudin2、Claudin3、Claudin4的表達情況。免疫熒光雙標分析結腸黏膜CRF-R1及CRF-R2在肥大細胞的表達情況。RT-PCR法檢測結腸CRF-R1mRNA、CRF-R2mRN

5、A的表達情況。
　　結果：
　　1.造模后模型組小鼠較對照組體重降低，排便時間縮短，糞便含水量增加，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。嬰兒雙歧桿菌組小鼠較模型組體重增加，排便時間延長，糞便含水量降低，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。在CRD擴張壓力分別為20mmHg、40mmHg、60mmHg時，模型組和嬰兒雙歧桿菌組小鼠較對照組AWR評分明顯增高(P<0.05)，在各壓力時嬰兒雙歧桿菌組與模型組相比，AWR評分明顯降

6、低(P<0.05)。在CRD擴張壓力為80mmHg時，三組小鼠的AWR評分無顯著差異(P＞0.05)。
　　2.與對照組相比，模型組組胺、類胰蛋白酶及 TNF-α表達量明顯增高(P<0.05)，而嬰兒雙歧桿菌組組胺、類胰蛋白酶及TNF-α表達量較模型組明顯降低(P<0.05)。嬰兒雙歧桿菌組組胺表達量較對照組明顯增加(P=0.011)，而類胰蛋白酶及TNF-α表達量較對照組無顯著差異（P>0.05）。
　　3.與對照組相比，

7、模型組結腸黏膜 CRF、PAR-2、Claudin2表達量增加， Claudin1、Claudin3、Claudin4表達量降低(P<0.05)；而嬰兒雙歧桿菌組較模型組結腸黏膜 CRF、PAR-2、Claudin2表達量降低， Claudin1、Claudin3、Claudin4表達量增高(P<0.05)。
　　4.模型組 CRF-R1+肥大細胞及 CRF-R2+肥大細胞數(shù)目較對照組明顯增高(P<0.05)；而嬰兒雙歧桿菌組 C

8、RF-R1+肥大細胞及 CRF-R2+肥大細胞數(shù)目較模型組明顯降低(P<0.05)。
　　5.模型組結腸CRF-R1 mRNA及CRF-R2 mRNA表達量較對照組明顯增高(P<0.05)；嬰兒雙歧桿菌組結腸CRF-R1 mRNA及CRF-R2 mRNA表達量較對模型組明顯降低(P<0.05)。嬰兒雙歧桿菌組CRF-R1mRNA較對照組無顯著差異（P=0.438），嬰兒雙歧桿菌組CRF-R2 mRNA較對照組明顯升高(P<0.05

9、)。
　　結論：
　　1.束縛應激法能夠成功誘導腹瀉型小鼠 IBS模型，嬰兒雙歧桿菌干預可減輕IBS小鼠的內(nèi)臟高敏感性。
　　2.在IBS小鼠模型中，應激可能通過引起結腸黏膜肥大細胞上CRF-R1和CRF-R2的表達增高進而引起肥大細胞的激活及其免疫因子釋放的增加，最終導致腸黏膜屏障功能障礙。
　　3.應用嬰兒雙歧桿菌可同時下調 IBS模型小鼠結腸黏膜肥大細胞上CRF-R1及CRF-R2的表達、減少IBS小鼠結腸