感染后腸易激綜合征小鼠模型中腸道免疫及粘膜屏障功能的改變.pdf

1、本文對感染后腸易激綜合征小鼠模型中腸道免疫及粘膜屏障功能的改變進(jìn)行了研究。本研究分為三個(gè)部分：
　　第一部分：感染后腸易激綜合征小鼠模型的建立。
　　目的：觀察NIH小鼠感染旋毛蟲2周，8周后腸道組織病理改變及內(nèi)臟敏感性的改變，建立一個(gè)可以真實(shí)模擬人體腸易激綜合征特征的動(dòng)物模型。
　　方法：6-8周齡雄性NIH小鼠給予350-400只旋毛蟲灌胃，感染2周，8周后用HE染色的方法評估近端結(jié)腸，遠(yuǎn)端結(jié)腸，空腸，回腸組織病理

2、情況，并對炎癥程度進(jìn)行評分；采用腹壁回撤反應(yīng)（AWR）評分判斷小鼠對結(jié)直腸擴(kuò)張（CRD）的內(nèi)臟敏感性。
　　結(jié)果： NIH小鼠在感染旋毛蟲2周后，HE染色顯示腸道組織明顯充血水腫，固有層及粘膜層出現(xiàn)大量的中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞浸潤，粘膜層破壞嚴(yán)重，并伴有中重度間質(zhì)性水腫，呈明顯炎癥性改變，炎癥評分明顯高于正常對照組小鼠（P＜0.05）；而感染8周后的NIH小鼠腸道組織HE染色則未顯示明顯損傷及炎癥浸潤，組織學(xué)評分也與正常組織無明

3、顯差異（P＞0.05）。在直腸擴(kuò)張壓力為40mmHg，60mmHg時(shí)，感染后2周模型組小鼠AWR評分顯著高于正常對照組（P＜0.05）；感染后8周模型組小鼠AWR評分低于2周模型組小鼠（P＜0.05），但高于正常對照組小鼠（P＜0.05）。2周，8周模型組小鼠的疼痛閾值均小于正常組（P＜0.05），且2周模型鼠疼痛閾值小于8周組（P＜0.05）。
　　結(jié)論： NIH小鼠在感染旋毛蟲8周后腸道炎癥消退，內(nèi)臟高敏感性持續(xù)存在，是一個(gè)良

4、好的伴有內(nèi)臟高敏感的感染后腸易激綜合征動(dòng)物模型。
　　第二部分：感染旋毛蟲小鼠腸道炎癥因子和屏障功能的改變。
　　目的：研究旋毛蟲感染NIH小鼠后不同時(shí)期腸道炎癥因子TNF-α，IL-12，IL-6， IL-4，IL-10，IL-17表達(dá)的變化及腸道通透性的變化。
　　方法：給予6-8周齡雄性NIH小鼠旋毛蟲灌胃，感染2周，8周后用HE染色的方法評估近端結(jié)腸，遠(yuǎn)端結(jié)腸，空腸，回腸組織病理情況，并對炎癥程度進(jìn)行評分；采用

5、Western-blot檢測各組小鼠回腸炎癥因子TNF-α，IL-12，IL-6，IL-4，IL-10，IL-17及緊密連接蛋白Occludin-1和Claudin-1的含量，對比各組間含量的差異；采用Ussing Chamber檢測各組小鼠回腸絨毛上皮（VE）和濾泡相關(guān)上皮（FAE）跨膜電阻值（TER）和異硫氰酸熒光素標(biāo)記的大分子右旋糖苷（FD440KD）通過率的改變。
　　結(jié)果： NIH小鼠在感染旋毛蟲2周后，HE染色顯示腸道

6、組織明顯充血水腫，固有層及粘膜層出現(xiàn)大量的中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞浸潤，粘膜層破壞嚴(yán)重，并伴有中重度間質(zhì)性水腫，呈明顯炎癥性改變，炎癥評分明顯高于正常對照組小鼠（P＜0.05）；而感染8周的NIH小鼠腸道組織HE染色則未顯示明顯炎癥浸潤，組織學(xué)評分也與正常組織無明顯差異（P＞0.05）。感染8周組小鼠IL-12的表達(dá)量明顯高于正常對照組（P＜0.05），而感染2周組小鼠IL-12的表達(dá)量與正常對照組無明顯差異（P＞0.05）；2周，8周

7、模型組小鼠IL-4表達(dá)量高于正常組，IL-10含量低于正常組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而TNF-α，IL-6， IL-17的表達(dá)量與正常組相比無明顯變化。2周模型組小鼠緊密連接蛋白 Occludin-1和Claudin-1的表達(dá)明顯低于正常組和8周模型組（P＜0.05），而8周模型組中兩者含量低于正常組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。2周，8周模型組VE的TER和FD4通過率明顯低于正常對照組（P＜0.05）；而FVE的TER

8、和FD4通過率與正常對照組相比無明顯改變（P＞0.05）。
　　結(jié)論：研究結(jié)果提示在旋毛蟲感染后的不同時(shí)期，小鼠腸道組織炎癥表現(xiàn)及免疫調(diào)節(jié)機(jī)制并不相同，回腸均存在屏障功能的異常及通透性的增加，且主要存在于絨毛上皮，但不同時(shí)期引起回腸通透性增加的機(jī)制可能不同。
　　第三部分：PI-IBS小鼠固有層樹突狀細(xì)胞介導(dǎo)粘膜屏障異常和內(nèi)臟高敏。
　　目的：在感染后腸易激綜合征（PI-IBS）的發(fā)展過程中，輕度炎癥越來越引起人們的注

9、意。固有層樹突狀細(xì)胞（LPDCs）作為一種抗原提呈細(xì)胞，在免疫激活中起了非常重要的作用。本研究旨在驗(yàn)證LPDCs可能有利于PI-IBS小鼠模型中腸道通透性的增加及內(nèi)臟高敏感的形成。
　　方法：通過給予旋毛蟲建立 PI-IBS小鼠模型。腹壁回撤反射（AWR）用于評估內(nèi)臟敏感性。通過常規(guī)HE染色進(jìn)行病理學(xué)評分及腸道細(xì)胞因子表達(dá)量的檢測來評估腸道炎癥。采用Ussing Chamber測量跨上皮電阻和FD4通透性。Western blot

10、ting檢測小鼠腸道組織緊密連接蛋白的表達(dá)量來評估腸道通透性。透射電鏡技術(shù)觀察小鼠腸道上皮細(xì)胞間緊密連接蛋白的結(jié)構(gòu)。處死小鼠后，消化腸道組織，并采用磁珠細(xì)胞分選術(shù)分離純化 LPDCs，然后將從PI-IBS小鼠模型中及正常對照組小鼠腸道中提取的1×106 LPDCs通過尾靜脈注射過繼給相應(yīng)的正常小鼠。在過繼LPDCs120h后，根據(jù)上述方法對小鼠進(jìn)行AWR評分，腸道炎癥和通透性進(jìn)行評估。
　　結(jié)果：小鼠在旋毛蟲感染的急性期及慢性期均

11、表現(xiàn)出腸道炎癥的出現(xiàn)，粘膜通透性的增加及內(nèi)臟高敏感性的形成。過繼了PI-IBS小鼠模型LPDCs的小鼠出現(xiàn)了輕度的炎癥----小鼠回腸組織中細(xì)胞因子 IL-4的表達(dá)量明顯增加。同時(shí)，過繼了PI-IBS小鼠LPDCs的小鼠回腸TER明顯降低，且出現(xiàn)超微結(jié)構(gòu)的改變，粘膜通透性增加。更有意思的是，接受了PI-IBS小鼠LPDCs的小鼠AWR評分明顯升高而疼痛閾值明顯降低。
　　結(jié)論： PI-IBS小鼠模型中的LPDCs不僅能夠?qū)⒛c道炎癥