p38 MAPK對燒傷大鼠微血管內(nèi)皮細(xì)胞連接及骨架重組的調(diào)控作用.pdf

1、目的(Objective)：微血管通透性增高是創(chuàng)傷、燒傷、休克和炎癥等許多病理過程中的重要變化，特別在燒傷性休克中對病情的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸具有重要的影響。通過計算機(jī)相關(guān)分析軟件的應(yīng)用，探討燒傷對微血管內(nèi)皮細(xì)胞肌動蛋白骨架和緊密連接重構(gòu)、通透性增高的影響以及p38 MAPK在燒傷微血管通透性升高中的作用與機(jī)理，進(jìn)一步闡明燒傷液體丟失的分子機(jī)制，探索新的治療方法以及發(fā)現(xiàn)新的藥物，為臨床工作中燒傷液體丟失的防治提供新靶點(diǎn)。 方法(

2、Methods)： 利用游離微血管技術(shù)，游離出正常和燒傷大鼠的皮膚微靜脈，分別作為實(shí)驗(yàn)研究的正常對照組和燒傷實(shí)驗(yàn)組。 利用游離微靜脈模型，標(biāo)記與ZO-1單克隆抗體耦合的熒光標(biāo)記蛋白以及F-actin熒光探針，通過激光掃描共聚焦顯微鏡觀察正常大鼠皮膚微靜脈和燒傷大鼠皮膚微靜脈緊密連接蛋白和骨架蛋白的分布及結(jié)構(gòu)，經(jīng)過計算機(jī)圖像和熒光比率測定法，定量觀察正常大鼠皮膚微靜脈的基礎(chǔ)通透性，并與骨架蛋白、緊密連接蛋白等進(jìn)行對比

3、，探討其相關(guān)性。 利用燒傷大鼠游離微靜脈模型，以p38 MAPK的特異性抑制劑SB2035080孵育，然后標(biāo)記與ZO-1單克隆抗體耦合的熒光標(biāo)記蛋白以及F-actin熒光探針，通過激光掃描共聚焦顯微鏡觀察SB2035080對燒傷后微靜脈內(nèi)皮緊密連接蛋白和骨架蛋白分布、結(jié)構(gòu)和通透性的影響。 結(jié)果(Result)： 1、燒傷對皮膚微靜脈內(nèi)皮F-actin和ZO-1分布的影響：燒傷大鼠的皮膚微靜脈內(nèi)皮肌動蛋白骨架F

4、-aetin和緊密連接蛋白ZO-1均發(fā)生了再分布和重組，周邊肌動蛋白纖維環(huán)解聚，內(nèi)皮細(xì)胞間緊密連接瓦解，規(guī)則的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)消失，細(xì)胞收縮變圓，細(xì)胞結(jié)構(gòu)喪失，血管內(nèi)殘留斷裂的F-actin和ZO-1碎片 2、燒傷對皮膚微靜脈通透性的影響：燒傷大鼠的皮膚微靜脈通透性明顯增高，Pa值為正常大鼠相應(yīng)觀察時間通透性的2～3倍，組間比較P<0.001。 3、燒傷皮膚微靜脈內(nèi)皮肌動蛋白骨架重組與通透性的關(guān)系：結(jié)果發(fā)現(xiàn)在PAR斷裂處有大

5、量熒光蛋白漏出，說明F-actin的重構(gòu)與通透性增高關(guān)系密切 4、p38 MAPK的特異性抑制劑SB2035080對燒傷大鼠皮膚微靜脈F-actin、ZO-1分布和通透性的影響：結(jié)果發(fā)現(xiàn)SB203580不但可逆轉(zhuǎn)燒傷引起的大鼠皮膚微靜脈內(nèi)皮肌動蛋白骨架F-actin和緊密連接蛋白ZO-1的重構(gòu)；還可明顯逆轉(zhuǎn)燒傷引起的血管通透性升高， 結(jié)論(Conclusions)： 1、燒傷可引起皮膚微靜脈內(nèi)皮細(xì)胞骨架蛋白F