腎上腺髓質素對膿毒癥大鼠小腸微血管內皮細胞的保護作用研究.pdf

1、目的：腎上腺髓質素（Adrenomedulin，ADM）是一種有52個氨基酸殘基組成的活性肽，其除了具有擴張血管，增加管壁通透性等功能外，還有報道腎上腺髓質素在對抗炎癥反應方面還具有抑制致炎因子釋放，穩(wěn)定血管內皮細胞的作用。因而本實驗欲觀察腎上腺髓質素對小腸微血管內皮的保護作用是否與降低血管細胞間黏附分子（Vascular CellAdhesion Molecule-1，VCAM-1）的表達從而導致炎癥因子的釋放減少有關，并以該途徑來減

2、緩或抑制膿毒癥的發(fā)生發(fā)展。
　　 方法：1.大鼠小腸微血管內皮細胞（RIMMVECs）在體外分離運用局部消化方法和差速黏附方法進行細胞的純化處理及培養(yǎng)，并根據RIMMVECs描繪其生長曲線及用CD34標記后免疫熒光鑒定RIMMVECs,然后分別用假手術組血清，膿毒癥組血清和ADM+膿毒癥組血清刺激24h后進行檢測；2. 用RT-PCR 法檢測各組血清刺激后RIMMVECs內VCAM-Mrna的轉錄水平，觀察ADM在轉錄水平對VC

3、AM-1的影響；3.流式細胞術檢測各組血清刺激后RIMMVECs 膜表面VCAM-1的表達，觀察ADM在分子表達水平對VCAM-1的影響。4.用ELISA 法檢測各組血清刺激RIMMVECs 培養(yǎng)后上清液中可溶性VCAM-1的含量，觀察ADM的輸入是否能減少RIMMVECs內VCAM-1的釋放。
　　 結果：1：局部消化方法和差速黏附方法得到純化的RIMMVECs，純度在90％以上，并用CD34 標記后免疫熒光進行了鑒定；2：酶

4、聯(lián)免疫吸附試驗結果顯示ADM 干預組血清刺激細胞24h后細胞培養(yǎng)上清液中VCAM-1的含量(0.21±0.06ng/ml)明顯較膿毒癥組(0.63±0.13ng/ml)的含量低，而ADM 干預組與正常組(0.09±0.02 ng/ml)無顯著統(tǒng)計學差異（P＞0.05)；3：RT-PCR 結果顯示ADM 干預組刺激的細胞內VCAM-1mRNA的水平低于膿毒癥組,有顯著的統(tǒng)計學差異（P＜0.05)，而與正常組比較無顯著的統(tǒng)計學差異（P＞0.

5、05)；4：FITC 標記抗大鼠VCAM-1單克隆抗體，流式細胞儀檢測顯示ADM 干預組刺激的RIMMVECs 膜表面VCAM-1表達(124.63±54.32)也低于膿毒癥組(202.75±57.21),而與正常組(112.95±47.39)比較無顯著的統(tǒng)計學差異（P＞0.05)。
　　 結論：1. ADM能降低膿毒癥血清刺激RIMMVECs后培養(yǎng)上清液中VCAM-1的含量，說明ADM 甚至能減少膿毒癥時RIMMVECs中VC

6、AM-1向體液中的釋放；2. ADM 處理組在細胞內VCAM-1mRNA的表達水平低于膿毒癥組，說明ADM能抑制VCAM-1在膿毒癥時在內皮細胞中的轉錄；3.ADM能降低膿毒癥血清刺激RIMMVECs后RIMMVECs胞膜上的表達，說明ADM能減少膿毒癥時VCAM-1在血管內皮上的表達量。因此從分子水平上論證了ADM通過抑制小腸微血管內皮細胞上，炎癥因子釋放上游的調控黏附分子VCAM-1的轉錄、表達和生成，從而減緩或抑制膿毒癥的發(fā)生發(fā)展