低溫低氧復(fù)合暴露對(duì)大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用.pdf

1、目的：研究低溫、低氧單因素及低溫低氧復(fù)合因素對(duì)大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用，闡明低溫低氧復(fù)合暴露損傷與單因素暴露損傷的區(qū)別及復(fù)合暴露的主要影響因素，為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)高原肺水腫的發(fā)病機(jī)理提供理論依據(jù)。
　　方法：⑴動(dòng)物暴露模型:24只雄性Wistar大鼠，體質(zhì)量180～200g，隨機(jī)分為4組:正常對(duì)照組(n=6):25℃室溫、常氧含量24h;低溫組(n=6):5℃低溫艙中常氧含量暴露24h低氧組(n=6):25℃室溫、低氧裝置中，設(shè)置

2、氧含量為10％，低氧暴露24h;低溫低氧組(n=6):5℃低溫艙中放置低氧裝置，氧含量為10％，低溫低氧暴露24h。檢測(cè)肺組織濕/干比值，病理?yè)p傷評(píng)分，測(cè)定血清中NOS、ET-1的含量，RT-PCR法檢測(cè)VEGF、caspase-12的mRNA表達(dá)情況。⑵細(xì)胞暴露模型:采用綜合酶消化法培養(yǎng)大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞。分別在常溫(37℃)、低溫(28℃)、低氧(3％O2)、低溫低氧(28℃、3％O2)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率，

3、試劑盒檢測(cè)LDH活力、SOD活力以及MDA含量、硝酸還原酶法檢測(cè)一氧化氮(NO)的釋放、RT-PCR法檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、內(nèi)皮素-1（ET-1）、細(xì)胞間粘附因子-1（ICAM-1）、IL-13、IL-6、TNF-α、caspase-12的基因表達(dá)水平，Hoechst33258和TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡。用析因分析的方法，闡明復(fù)合損傷與單因素?fù)p傷的區(qū)別，有無(wú)交互作用。
　　結(jié)果：①動(dòng)物暴露模型:低溫、低氧單因素和低溫低

4、氧復(fù)合因素均使肺組織的含水量增加，肺組織出現(xiàn)實(shí)質(zhì)性損傷，血清中NOS含量減少而ET-1含量增加， VEGF、caspase-12的mRNA表達(dá)水平上調(diào)。低溫和低氧兩因素在以上對(duì)肺組織的損傷及功能改變方面存在正交互作用。②細(xì)胞暴露模型:原代培養(yǎng)的大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞呈典型的鵝卵石樣排列，經(jīng)CD31免疫熒光染色、Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫熒光染色、植物凝集素結(jié)合試驗(yàn)鑒定為微血管內(nèi)皮細(xì)胞。與對(duì)照組相比，低溫組、低氧組、低溫低氧組PMVECs的細(xì)胞膜通

5、透性增加（LDH活力增加、VEGF的mRNA表達(dá)上調(diào)）、炎性因子分泌增加（ICAM-1/IL-1β/IL-6/TNF-α的mRNA表達(dá)增加）、血管活性物質(zhì)分泌失衡（NO釋放減少、ET-1的mRNA表達(dá)上調(diào)）、細(xì)胞凋亡增加并且caspase-12的mRNA表達(dá)上調(diào)，而在氧化應(yīng)激損傷方面，SOD的活力則表現(xiàn)為低溫組、低溫低氧組上升，低氧組下降，MDA則只表現(xiàn)為低氧組含量上升;低溫和低氧兩個(gè)因素在細(xì)胞存活率、SOD活力、MDA含量、LDH水平