阿魏酸對(duì)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的:
　　本實(shí)驗(yàn)主要在細(xì)胞水平上，運(yùn)用體外構(gòu)建模擬血管性癡呆的糖氧剝奪(oxygen-glucose deprivation，OGD)的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(brain mierovascularendothelial cells，BMECs)模型，并在在不同時(shí)間點(diǎn)（2，4，6小時(shí)）研究阿魏酸(Ferulic acid，F(xiàn)A)對(duì)這個(gè)模型所致的細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。
　　方法:
　　通過在細(xì)胞水平上，運(yùn)用（95％氮?dú)?5

2、％二氧化碳）混合氣體的方法，模型缺氧缺糖的細(xì)胞環(huán)境，建立體外OGD模型。按照實(shí)驗(yàn)?zāi)康慕⒎纸M，正常組，模型組，阿魏酸組（FA組）。首先運(yùn)用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性，待模型組的細(xì)胞活性對(duì)比正常組有顯著性差異，提示細(xì)胞造模成功后，在不同時(shí)間段造模的細(xì)胞模型給予阿魏酸進(jìn)行預(yù)保護(hù)，探究阿魏酸的保護(hù)氧化損傷的細(xì)胞的作用。運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)技術(shù)，研究和檢測(cè)活性氧(reactive oxygen species，ROS)產(chǎn)生量，ROS的過度累計(jì)會(huì)損傷細(xì)胞

3、的提示細(xì)胞的氧化損傷的程度，檢測(cè)ROS的產(chǎn)量直接反應(yīng)了細(xì)胞上的氧化損傷的水平。運(yùn)用硫代巴比妥酸顯色法，研究和檢測(cè)細(xì)胞丙二醛(methane dicarboxylicaldehyde，MDA)水平，MDA是膜脂氧化的重要產(chǎn)物之一，MDA的水平也提示著細(xì)胞氧化損傷的水平。運(yùn)用氮藍(lán)四唑顯色法，研究和檢測(cè)細(xì)胞總超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)活性。SOD是廣泛存在于動(dòng)植物中的一種重要的抗氧化酶，SOD的活性提示著

4、細(xì)胞的抗氧化能力。
　　結(jié)果:
　　體外糖氧剝奪模型對(duì)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞造成的氧化損傷嚴(yán)重性呈時(shí)間依賴性，并在一定時(shí)間內(nèi)(2，4，6h)損傷程度隨時(shí)間遞增。模型組隨著OGD的時(shí)間的增加(2，4，6h)細(xì)胞活性不斷降低，提示造模的成功，阿魏酸能顯著增強(qiáng)被損傷的細(xì)胞存活性。在流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)的模型組的ROS的產(chǎn)量隨著時(shí)間的增加而增加，而給藥阿魏酸后可以顯著減少ROS的產(chǎn)量，提示阿魏酸的抗氧化作用。同時(shí)，給藥阿魏酸后明顯削減細(xì)胞內(nèi)MD