腦微血管內(nèi)皮細胞對神經(jīng)干細胞分化與凋亡的影響.pdf

1、目的：觀察不同比例的腦微血管內(nèi)皮細胞(vascular endothelial cell，VEC)對體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞(Neural stem cells，NSCs)分化與凋亡的影響。 方法：采用機械方法，從新生大鼠腦組織中分離神經(jīng)干細胞及腦微血管內(nèi)皮細胞進行培養(yǎng)。傳二代后對NSCs進行Nestin免疫組化染色鑒定，用Ⅷ因子相關(guān)抗原對VEC進行免疫組化鑒定。然后進行VEC與NSCs共同培養(yǎng)，在普通培養(yǎng)板中VEC與NSCs接種比

2、例分別為：1：100、1：10、1：1、10：1、100：1，各組按常規(guī)細胞培養(yǎng)方法進行換液、傳代分瓶、細胞計數(shù)。隔馬在倒置顯微鏡下進行細胞形態(tài)學觀察，共培養(yǎng)14天后采用免疫組化方法及免疫熒光技術(shù)觀察NSC分化及凋亡情況。以微管相關(guān)蛋白(MAP-2)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)及caspas分別作為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞與凋亡的標志。以1 00倍視野倒置顯微鏡對免疫組化染色的NSC進行計數(shù)(每視野面積為0.196mm作為計數(shù)面積)。每組

3、細胞均進行6孔NSC的培養(yǎng)，每孔隨機選4個視野計數(shù)MAP-2、GFAP及caspas陽性細胞數(shù)。 結(jié)果：腦微血管內(nèi)皮細胞與神經(jīng)干細胞共培養(yǎng)神經(jīng)干細胞定向分化為神經(jīng)元的數(shù)量明顯高于對照組(P<0.05)；定向分化為星形膠質(zhì)細胞的數(shù)量顯著低于對照組(P<0.05)；且腦微血管內(nèi)皮細胞與神經(jīng)干細胞以1：10比例共培養(yǎng)時最為顯著(P<0.05)；神經(jīng)干細胞凋亡數(shù)顯著低于對照組(P<0.05)，但各共培養(yǎng)組間無顯著差異(P>0.05)。