銅對(duì)大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接蛋白及氧化應(yīng)激的影響.pdf

1、銅是動(dòng)物機(jī)體必需的微量元素之一。在大腦中，銅參與大量的生物進(jìn)程，為機(jī)體發(fā)揮正常的生理功能扮演著重要的角色。但是，許多神經(jīng)中樞疾病，特別是神經(jīng)退行性疾病也與銅息息相關(guān)。為探究銅與大腦之間的密切關(guān)系，本試驗(yàn)通過(guò)原代培養(yǎng)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞（brain microvascular endothelial cells，BMECs）建立體外模型，以30μM、60μM、120μM、180μM、240μM、300μM共6個(gè)不同濃度的CuCl2作用于BME

2、Cs12 h，從細(xì)胞毒性、claudin-1、-3、-5的蛋白水平、基因水平和細(xì)胞氧化應(yīng)激相關(guān)的酶活水平幾個(gè)層面來(lái)評(píng)估不同濃度的銅對(duì)BMECs的影響。結(jié)果顯示：
　　1.通過(guò)牛血清白蛋白梯度離心和Ⅱ型膠原酶消化的方法分離原代BMECs的方法得當(dāng)，特異性抗原Ⅷ因子免疫熒光鑒定呈陽(yáng)性，鈣粘蛋白 CD144流式細(xì)胞術(shù)鑒定細(xì)胞純度高達(dá)99％以上。
　　2.銅離子濃度的升高使BMECs的細(xì)胞活力呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，120μM銅離子

3、濃度組的細(xì)胞活力在各個(gè)銅離子濃度組中居于高峰（63%）。胞外乳酸脫氫酶的活性測(cè)定結(jié)果與細(xì)胞活力的變化趨勢(shì)相一致。另外，BMECs對(duì)生長(zhǎng)的條件與環(huán)境要求較高，不添加胎牛血清的陰性組也會(huì)使細(xì)胞活力大幅度下降。
　　3. Claudin-1、-3、-5隨著銅離子濃度升高呈現(xiàn)出相似的蛋白表達(dá)變化趨勢(shì)，均是從低濃度銅離子組到中間濃度銅離子組呈現(xiàn)下調(diào)，在180μM銅離子濃度組達(dá)到低峰，從中間濃度銅離子組到高濃度銅離子組又呈現(xiàn)上調(diào)。
　　

4、4. Claudin-1、-3、-5的mRNA相對(duì)表達(dá)量雖然相比于陰性組有著統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異，但是各個(gè)銅離子濃度組之間并沒(méi)有明顯的趨勢(shì)變化。
　　5.在氧化應(yīng)激的過(guò)程中，銅鋅-超氧化物歧化酶（CuZn-SOD）是BMECs的超氧化物歧化酶（SOD）主要分型，隨著銅離子濃度的升高，CuZn-SOD活性提高，但是銅負(fù)載可能存在一個(gè)臨界點(diǎn)，在120μM銅離子濃度組之后的Cu-SOD活性呈現(xiàn)下降。從整體上看，過(guò)氧化物酶（CAT）活性隨著銅離

5、子濃度的提高而下降，在300μM銅離子濃度組降至最低點(diǎn)。誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）是BMECs的一氧化氮合酶（NOS）主要分型，隨著銅離子濃度的提高，iNOS的活性在120μM銅離子濃度組達(dá)到高峰，隨后又呈下降趨勢(shì)。
　　結(jié)論：銅離子易對(duì)BMECs產(chǎn)生細(xì)胞毒性，但是可能存在最適濃度的銅離子能夠協(xié)助BMECs修復(fù)。銅離子能夠介導(dǎo)影響claudin-1、-3、-5的蛋白表達(dá)水平，且與濃度有密切關(guān)聯(lián)。銅離子會(huì)對(duì)BMECs造成氧化損傷