CBP治療通過調(diào)節(jié)ROCK介導(dǎo)的細(xì)胞間緊密連接蛋白改善SAP患者內(nèi)皮細(xì)胞通透性.pdf

1、背景：重癥急性胰腺炎(SAP)作為一種常見的急腹癥，病因復(fù)雜，病情進(jìn)展快，可迅速發(fā)展為全身炎癥綜合癥(SIRS)，進(jìn)而發(fā)展為多器官功能障礙綜合征(MODS)，而內(nèi)皮細(xì)胞作為血管的最內(nèi)層屏障，其細(xì)胞間通透性增加可能參與了MODS的發(fā)生。細(xì)胞間緊密連接蛋白是細(xì)胞間連接的重要組成部分，在維持內(nèi)皮屏障完整中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。近年來連續(xù)性血液凈化(CBP)治療已廣泛應(yīng)用臨床搶救包括SAP、MODS在內(nèi)的各種危重患者的治療，明顯的改善了患者的預(yù)

2、后。我們既往的研究顯示CBP治療可以改善SAP患者內(nèi)皮細(xì)胞通透性，但其機(jī)制是否與細(xì)胞間緊密連接異常表達(dá)與分布有關(guān)，有待進(jìn)一步深入研究。本文旨在探討細(xì)胞間緊密連接蛋白在CBP改善SAP患者內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能障礙中的作用。
　　方法：用SAP患者CBP治療的不同時間點(diǎn)血清刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，或予不同濃度Rho激酶(ROCK)抑制劑Y-27632(5μM、10μM、20μM)預(yù)處理后加入SAP治療前血清干預(yù)內(nèi)皮細(xì)胞。Fluorescen

3、ce reader檢測單層內(nèi)皮細(xì)胞對熒光素標(biāo)記的牛血清白蛋白的通透量，免疫熒光染色檢測緊密連接蛋白Occludin、Claud in-1的分布與重排，Western blot檢測Occludin、Claud in-1蛋白表達(dá)水平的變化，共聚焦顯微鏡觀察F-actin應(yīng)力微絲的形成。
　　結(jié)果：正常單層內(nèi)皮細(xì)胞Occludin、Claud in-1主要分布在細(xì)胞周邊，細(xì)胞與細(xì)胞間連續(xù)連接形成光滑的連接帶。SAP患者CBP治療前血清刺

4、激內(nèi)皮細(xì)胞后，細(xì)胞通透性較對照組明顯增加，而緊密連接蛋白Occludin、Claud in-1的連接中斷或破壞，表達(dá)減少，F(xiàn)-actin應(yīng)力微絲的密度及數(shù)量均增大，而經(jīng)CBP治療后血清刺激內(nèi)皮細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞通透性較CBP治療前組降低，而Occludin、Claudin-1的連接中斷或破壞有所恢復(fù)，蛋白表達(dá)水平增加，且具有顯著性差異；應(yīng)力微絲的數(shù)量和密度較CBP治療前組減少。加入Rho激酶抑制劑Y-27632處理細(xì)胞后，與CBP治療前組比

5、，內(nèi)皮細(xì)胞通透性降低，緊密連接蛋白Occludin、Claudin-1的連接中斷或破壞較CBP治療前組改善，同時蛋白表達(dá)水平增加，F(xiàn)-actin應(yīng)力微絲的形成較CBP治療前組減少，且其效應(yīng)呈劑量依賴性。
　　結(jié)論：SAP患者血清誘導(dǎo)的單層內(nèi)皮細(xì)胞通透性明顯增加，而CBP治療后SAP患者血清誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞的通透性降低，其機(jī)制可能是與CBP治療后改善ROCK介導(dǎo)緊密連接蛋白Occludin、Claudin-1的表達(dá)和分布及細(xì)胞骨架蛋白