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文檔簡介
1、目的：以人臍靜脈內(nèi)皮細胞HUVECs作為研究對象，探討RTEF-1對血管內(nèi)皮細胞通透性異常增加的影響及其機制。
方法：用PXJ40/RTEF-1質(zhì)粒及空白對照質(zhì)粒轉染HUVECs細胞建立RTEF-1過表達及對照細胞模型；用RTEF-1 siRNA1、RTEF-1 siRNA2及negative control siRNA建立RTEF-1抑制及對照的細胞模型；用Q-PCR及western blot檢測RTEF-1過表達及抑制效率
2、后，將細胞分為5組：control組：轉染PXJ40空白對照質(zhì)粒的HUVECs細胞；RTEF-1 o/e組：轉染PXJ40質(zhì)粒過表達RTEF-1的HUVECs細胞；NC siRNA組：用negative control siRNA轉染的HUVECs細胞；RTEF-1 siRNA1組：用RTEF-1 siRNA1轉染的HUVECs細胞；RTEF-1 siRNA2組：用RTEF-1 siRNA2轉染的HUVECs細胞。采用transwell
3、雙室式單層內(nèi)皮細胞模型系統(tǒng)檢測RTEF-1過表達及抑制對LPS誘導的內(nèi)皮細胞通透性增加的影響。用Q-PCR及western blot檢測RTEF-1過表達及抑制對Edg-1、SPHK1,2、用Q-PCR檢測緊密連接相關基因claudin3、claudin4、ZO-1、ZO-2及occludin，粘附連接相關基因VE-cadherin以及縫隙連接相關基因CX43、CX37及CX40表達的影響。
結果：LPS誘導內(nèi)皮細胞通透性增加
4、，過表達RTEF-1可抑制這種增加的內(nèi)皮細胞通透性（P<0.05）；RTEF-1過表達上調(diào)Edg-1表達，抑制RTEF-1基因表達可下調(diào)Edg-1、SPHK1、SPHK2表達，上調(diào)claudin3、claudin4及CX43 mRNA表達，對ZO-1、ZO-2、occludin、VE-cadherin、 CX37以及CX40表達無明顯影響。
結論：RTEF-1抑制LPS誘導的內(nèi)皮細胞通透性增加，其機制與RTEF-1調(diào)控Edg-
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