LPS預(yù)處理PMNs提取液對腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性的影響及機(jī)制研究.pdf

1、中南大學(xué)碩士學(xué)位論文LPS預(yù)處理PMNs提取液對腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性的影響及機(jī)制研究姓名：段元冬申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：兒科學(xué)指導(dǎo)教師：尹飛20071001碩士學(xué)位論文中文摘要方法1用Percol1非連續(xù)密度梯度沉降法分離、提純健康志愿者外周靜脈血PMNs，瑞氏染色觀察PMNs形態(tài)，臺盼藍(lán)染色檢測細(xì)胞活性。2用10011g／mlLPS預(yù)處理PMNs后置于37℃5％CO：恒溫培養(yǎng)箱，分別于5、15、30、45、60、90min6個時間點(diǎn)

2、離心后提取無細(xì)胞上清液，LC6A高效液相色譜熒光檢測法測定其Glu濃度。3原代分離、純化培養(yǎng)大鼠BMECs，Vlll因子鑒定其細(xì)胞屬性。4將體外培養(yǎng)的單層BMECs分為6組：正常對照組，LPS預(yù)處理PMN提取液組，LPS預(yù)處理組，PMNs提取液預(yù)處理組，MK一801預(yù)處理組，Glu預(yù)處理組，分別給予相應(yīng)預(yù)處理后，Y計(jì)數(shù)儀檢測挖5I一牛血清白蛋白(12sIBSA)通過量評價BMECs通透性。5Western—blotting檢測正常對照組

3、、LPS預(yù)處理PMNs提取液組、LPS預(yù)處理組、PMNs提取液預(yù)處理組、Glu預(yù)處理組、陽性對照組BMECs上NMDARl的表達(dá)變化。結(jié)果1外周靜脈血P心s瑞氏染色可見大量的分葉核的中性粒細(xì)胞，PMNs純度為976％057％，PMNs的回收率為897％74％，臺盼藍(lán)染色活率98％，PMNs形態(tài)改變8％。2LPS預(yù)處理PMNs5min亞組Glu濃度最高為63191454(umol／L)，與正常對照組比較差異有顯著性意義(P001)；3VI