耳蝸血管紋微血管內皮細胞通透性分子調控機理的初步研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學碩士學位論文耳蝸血管紋微血管內皮細胞通透性分子調控機理的初步研究姓名：潘明金申請學位級別：碩士專業(yè)：耳鼻咽喉科學指導教師：張學淵2002.5.1耳毒性藥物速尿作為處理因素，將其分別與豚鼠耳蝸血管紋微血管內皮細胞孵育3 小時，然后對耳蝸血管紋微血管內皮細胞c A M P 和F —a c t i n 進行檢測，以研究霍亂毒素和速尿對耳蝸血管紋微血管內皮細胞c A M P 含量和F 一量的影響。設對照組。豚鼠耳蝸血管紋組織塊經膠原

2、酶I 消化，培養(yǎng)2 4 小時，培分細胞貼壁伸展，呈短梭形或長圓形。7 天后，培養(yǎng)瓶內出現多個由短梭形或鈍圓形細胞呈“鋪路石狀”排列形成的細胞島。經過反復多次刮除雜細胞并使用內皮細胞條件培養(yǎng)液，細胞形態(tài)趨于一致，為短梭形或鈍圓形細胞。細胞排列致密時，細胞間隙消失，彼此融合形成致密融合的細胞單層，呈現典型的“鋪路石”樣外觀。所培養(yǎng)的細胞經免疫組化( S P 法) 鑒定，9 9 ％以上細胞胞漿內具有內皮細胞特有的Ⅷ因子抗原，提示為內皮細胞。用

3、所培養(yǎng)的耳蝸血管紋微血管內皮細胞建立通透性體外模型；2 ．霍亂毒素能明顯增強耳蝸血管紋微血管內皮的屏障功能，使牛血清白蛋白和伊文氏蘭的通透率顯著降低( P < 0 ．0 1 ) ；3 ．本模型牛血清白蛋白和伊文氏蘭的通透曲線都為上升曲線。同對照組曲線相比較，霍亂毒素組曲線明顯低于對照組，而速尿組曲線則明顯高于對照組，進一步提示霍亂毒素能顯著增強耳蝸血管紋微血管內皮的屏障功能，而速尿則能顯著減弱耳蝸血管紋微血管內皮的屏障功能；4 ．

4、霍亂毒素能使耳蝸血管紋微血管內皮細胞c A M P 的含量顯著增J J f l ( P < 0 ．0 1 ) ，增加可達2 —1 0 倍，且隨著霍亂毒素濃度的增大有增多的趨勢，內皮細胞F —a c t i n 的含量則顯著減少( P < 0 ．0 5 ) ，且核周F —a c t i n 減少尤為明顯；而速尿作用恰好與之相反，能使耳蝸血管紋微血管內皮細胞c A M P 的含量顯著減少( P < O ．0 1 ) ，內皮