遺傳性痙攣性截癱致病基因SPG11復(fù)合雜合突變位點新發(fā)現(xiàn).pdf

1、第一部分，背景：遺傳性痙攣性截癱(Hereditaryspasticparaplegia,HSP)是一種具有高度臨床和遺傳異質(zhì)性的神經(jīng)系統(tǒng)單基因遺傳病,遺傳方式有常染色體顯性遺傳、常染色體隱性遺傳及X連鎖隱性遺傳。根據(jù)臨床表現(xiàn)不同該病可分為兩型,單純型以雙下肢痙攣性截癱為主要表現(xiàn),復(fù)雜型可伴脊髓外其他系統(tǒng)損害。本研究選取一個非近親婚配遺傳性痙攣性截癱家系,同一代的4名子女中,3人發(fā)病(男:女=1:2),家系內(nèi)其他成員尚未發(fā)病。
　

2、　目的：明確本家系致病基因,評估家系內(nèi)尚未發(fā)病的成員未來患病的可能性,并為家族成員的正?；榕浼吧】岛蟠峁┗蛟\斷依據(jù)。
　　方法：繪制標(biāo)準(zhǔn)家系圖,選取10名家系成員為待測樣本(患者父母2人、患者及其同輩兄妹共4人、患者子女2人、來自患者父方及母方的旁系親屬各1人)。1、臨床檢查:包括病史采集、查體、實驗室檢查(血常規(guī)、生化、葉酸、維生素B12等)、腦電圖、顱腦磁共振檢查等。2、基因檢測:取上述10個樣本外周血,提取DNA。(

3、1)對3名患者及其雙親進(jìn)行全基因組外顯子測序,獲取候選致病基因突變位點;(2)對可能具有致病意義的突變位點在上述10個樣本內(nèi)進(jìn)行Sanger測序,驗證突變基因型在家系內(nèi)的分布與臨床表型是否呈共分離;(3)以100名家系外無血緣關(guān)系的正常個體為對照組,檢測正常人群中是否存在此突變,對突變位點與疾病的關(guān)聯(lián)性做進(jìn)一步驗證。
　　結(jié)果：(1)臨床表現(xiàn):3名患者發(fā)病年齡分別為13、16、13(歲),從發(fā)病到就診時的病程分別為19、14、12

4、(年),均表現(xiàn)為典型的雙下肢痙攣性截癱,伴不同程度的癲癇發(fā)作、智能下降、皮膚病變等其他系統(tǒng)損害的表現(xiàn),頭顱核磁共振檢查可見胼胝體發(fā)育不良。(2)基因檢測:通過全基因組外顯子測序及候選基因突變驗證,發(fā)現(xiàn)了與HSP致病相關(guān)的位于SPG11上的新復(fù)合雜合突變位點:c.6856C>T(p.R2286X)及c.2863delG(p.Glu955Lysfs*8)。其中,突變c.2863delG目前國內(nèi)外均無相關(guān)研究報道,雖然c.6856C>T目前已

5、有文獻(xiàn)報道,但這兩個突變作為復(fù)合雜合突變同時出現(xiàn)在生物體內(nèi)致病,目前國內(nèi)外均無相關(guān)研究報道,為一個新發(fā)現(xiàn)。(3)基因診斷:本家系中,3名患者均同時攜帶有上述兩種突變,來自母方的旁系親屬基因型正常,其余6名家系成員均為致病基因攜帶者,只攜帶有該復(fù)合雜合突變中的一種突變。
　　結(jié)論：位于SPG11上的復(fù)合雜合突變c.6856C>T(p.R2286X)及c.2863delG(p.Glu955Lysfs*8),與遺傳性痙攣性截癱致病相關(guān),

6、這一復(fù)合雜合突變?yōu)閲鴥?nèi)外首次報道。上述研究結(jié)果顯示,患者父母、與患者同代的1名尚未發(fā)病女子及患者的后代均為致病基因攜帶者,不會發(fā)病,且通過基因檢測,均可生育健康后代。本次新發(fā)現(xiàn)的突變位點在一定程度上豐富了SPG11的突變信息,并為HSP的基因診斷提供了更多的依據(jù)。
　　第二部分，背景：病毒性腦炎是由多種病毒引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病,該病重癥病死率高,病原體分離培養(yǎng)及檢測陽性率低,且部分患者易出現(xiàn)臨床癥狀及輔助檢查結(jié)果的不典型,

7、為病毒性與非病毒性中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的鑒別診斷帶來困難。腦脊液中含有多種小分子物質(zhì)及細(xì)胞因子,且與腦組織細(xì)胞外液直接相連,神經(jīng)元的缺失、損傷和/或突觸受損、血腦屏障破壞等都會引起腦脊液中蛋白質(zhì)的特異性改變,從而動態(tài)反映腦組織代謝變化及內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定性。
　　目的：通過對不同患者腦脊液中巨噬細(xì)胞移動抑制因子(MIF)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)、E-選擇素及P-選擇素含量的測定及對比,為病毒性與非病毒性中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的鑒別診斷提供新的

8、臨床依據(jù)。
　　方法：設(shè)試驗組A:病毒性腦炎患者60例;對照組B:非病毒性中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病患者60例;正常對照組C:正常人10例。分別采集各組患者腦脊液,應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)對腦脊液中MIF、GFAP、E-選擇素及P-選擇素四種因子的含量進(jìn)行測定,并對各組間數(shù)值的差異進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果：實驗組A與正常人對照C相比,病毒性腦炎患者腦脊液中MIF、E-選擇素和P-選擇素的含量明顯升高,GFAP的含量在

9、兩組之間則無顯著性差異;對照組B與正常對照C相比,非病毒性中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病患者腦脊液中MIF、GFAP和P-選擇素的含量均明顯升高,E-選擇素的含量則有一定程度的下降;試驗組A與對照組B相比,病毒性腦炎患者腦脊液中MIF和GFAP的含量較B組明顯降低,而E-選擇素和P-選擇素的含量則較B組明顯升高,上述差別均有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：在病毒性與非病毒性中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病患者間,腦脊液中MIF、GFAP、E-選擇素和P-選