應用全外顯子測序對一個遺傳性痙攣性截癱家系致病基因的研究.pdf

1、目的：
　　遺傳性痙攣性截癱（Hereditary Spastic Paraplegia，HSP）是一種具有高度臨床和遺傳異質性的神經(jīng)退行性疾病，典型臨床癥狀是雙下肢進行性肌肉緊張、肌無力和痙攣狀態(tài)。本研究旨在應用全外顯子測序對一個中國漢族HSP家系的致病基因進行研究，為家系患者做出準確的基因診斷，為產(chǎn)前診斷和HSP致病機理的研究奠定基礎。
　　方法：
　　收集一個包含5代32人的HSP家系，繪制標準家系圖，選取該家系

2、Ⅲ代7人、Ⅳ代12人作為研究對象，采集外周抗凝血樣并提取基因組DNA（gDNA）。對先證者（Ⅳ11）、先證者患病姐姐（Ⅳ8）和先證者未患病哥哥（Ⅳ9）進行一系列臨床檢查，包括病史采集、體格檢查、顱腦磁共振檢查。選?、?1、Ⅳ8和Ⅳ9的gDNA樣本進行全外顯子測序，運用SIFT、PolyPhen2、DNAMAN等生物信息學分析軟件獲取可疑致病基因突變位點。應用PCR擴增及Sanger測序的方法將可疑致病突變位點在該家系19名研究對象和50

3、例與該家系無血緣關系的健康對照者中進行驗證，分析該位點在家系內是否呈共分離，從而進一步驗證該位點與該家系的關聯(lián)性。
　　結果：
　　臨床檢查結果：Ⅳ11和Ⅳ8均表現(xiàn)典型雙下肢進行性痙攣性截癱，無脊髓外其他系統(tǒng)癥狀，顱腦、頸椎、胸椎核磁共振檢查均未見明顯異常?；驒z測結果：通過全外顯子測序和Sanger測序驗證，發(fā)現(xiàn)該家系中6例患者均攜帶SPAST（SPG4）上的同一突變位點（c.1606C＞T，p.Gln536X），家系中1

4、3例正常者和50例與該家系無血緣關系的健康對照者中均未發(fā)現(xiàn)該突變，表明這一突變位點在該家系中呈共分離。此外，該突變位點在國內外尚未報道，是一個新發(fā)現(xiàn)突變位點。
　　結論：
　　結合臨床癥狀和基因檢測結果確診先證者及家系其他患者所患疾病為單純型遺傳性痙攣性截癱，新發(fā)現(xiàn)的SPAST（SPG4）上c.1606C>T，p.Gln536X雜合突變是該HSP家系的致病基因突變，這不僅拓寬了SPAST（SPG4）基因突變譜，也為該家系產(chǎn)前