新的遺傳性痙攣性截癱亞型候選基因突變分析.pdf

1、背景：遺傳性痙攣性截癱(hereditary spastic paraplegia，HSP或SPG)是一種具有高度臨床和遺傳異質(zhì)性的神經(jīng)系統(tǒng)遺傳病，患病率為2/10萬～9.6/10萬，臨床上以緩慢進展的雙下肢肌張力增高和無力為主要特征，復(fù)雜型可合并癡呆、共濟失調(diào)、錐體外系癥狀、視網(wǎng)膜色素變性、視神經(jīng)萎縮、白內(nèi)障、耳聾、皮膚病變等。其遺傳方式有常染色體顯性遺傳(AD)、常染色體隱性遺傳(AR)及X連鎖隱性遺傳(XR)，其中以常染色體顯性遺

2、傳最為常見。隨著分子遺傳學(xué)研究進展，到目前為止，遺傳性痙攣性截癱至少已定位35型，但只有17型致病基因被克隆。在前期工作中，采集到一個來自山東省和內(nèi)蒙古地區(qū)呈常染色體顯性遺傳的單純型HSP家系，HSP患者及家系成員血樣標本共19份，其中患者7例(男性5例，女性2例)。在對該HSP家系進行了atlastin、spastfn、NIPA1、KIF5A、Hsp60和BSCL2基因突變分析和已知位點的排除定位分析后，發(fā)現(xiàn)該家系與已知位點均不連鎖，

3、確定為一型新的遺傳性痙攣性截癱亞型，然后通過全基因組掃描、連鎖分析和單體型分析，最終將該HSP家系定位于染色體11p11.2-p14.1上微衛(wèi)星標記D11S1324與D11S1993之間約18.88cM范圍內(nèi)，最高LOD值為2.36，這是國際上定位的一型新的常染色體顯性遺傳HSP疾病基因位點，命名為SPG34。 目的：克隆該新的遺傳性痙攣性截癱亞型的致病基因。 方法：采用“位置候選克隆”策略，應(yīng)用生物信息學(xué)方法，在疾病基

4、因定位區(qū)間內(nèi)篩選10個基因作為候選基因；設(shè)計合成擴增候選基因外顯子及包括外顯子與內(nèi)含子交界區(qū)的引物，用DNA直接測序法對PCR產(chǎn)物測序然后進行序列變異分析。 結(jié)果：應(yīng)用生物信息學(xué)方法篩出10個候選基因，分別為DPH4、TTC17、DKFZP586H2123、ABTB2、CD44、COMMD9、Protor2、API5、Cllorf41和C11orf55基因。應(yīng)用DNA直接測序，在ABTB2、CD44、COMMD9、Protor2

5、和Cllorf41基因共發(fā)現(xiàn)15個序列變異，分別為：ABTB2基因的192C>G、IVS6-75T>C、IVS15+34T>2：CD44基因的IVS8-60T>C、1440T>C：COMMD9基因的IVS4+84G>A：Protor2基因的30C>T、IVS2-15T>G，IVS6+45T>C，IVS7+104T>C，627A>G，IVS9+167A>G；CllDrf41基因的4432A>C、4638G>A、IVS16+13T>C，均為

6、已報道的SNP。DPH4、TTC17、DKFZP586H2123、API5和Cllorf55基因未發(fā)現(xiàn)任何序列變異。 結(jié)論： 1.排除了DPH4、TTC17、DKFZP586H2123、ABTB2、CD44、COMMD9、Protor2、API5、Cllorf41和Cllorf55基因為此新的HSP亞犁致病基因的可能： 2.發(fā)現(xiàn)該家系患者存在15個已報道的單核苷酸多態(tài)：ABTB2基因的192C>G、IVS6-75