CD151-整合素α3β1-α6β1復合體對HUVEC黏附功能的影響及分子機制研究.pdf

1、研究目的：通過將CD151及CD151-AAA194-196突變體基因轉入臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs),在體外細胞水平研究CD151及突變體基因對內(nèi)皮細胞黏附功能的影響及其分子機制。
　　研究方法：1.pAAV-CD151和pAAV-CD151-AAA194-196真核表達質(zhì)粒的篩選和提取。
　　2.培養(yǎng)臍靜脈內(nèi)皮細胞,并隨機分為四組,分別用pAAV-GFP、pAAV-CD151和pAAV-CD151-AAA194-196

2、轉染內(nèi)皮細胞,應用細胞黏附實驗檢測CD151及其突變體對細胞-ECM的黏附影響,細胞聚集實驗檢測CD151及其突變體對細胞-細胞間黏附的影響;應用免疫熒光染色觀察F-actin分布的變化;免疫共沉淀方法檢測CD151-整合素α3/α6復合體形成,WesternBlot檢測各組CD151、FAK、p-FAK-925、Rac1/2/3、Cdc42、p-Rac1/Cdc42、p-MLC及細胞膜和細胞漿中蛋白RhoA的表達。
　　實驗結果

3、：1.質(zhì)粒轉染后,WesternBlot顯示CD151及其突變體組CD151蛋白表達水平均高于Control組和GFP組(P<0.05),CD151-整合素α3β1復合體的形成在CD151組明顯高于Control組和GFP組,而突變體組復合體的形成被破壞(P<0.05);
　　2.與control組和GFP組相比,CD151組顯著增加了HUVEC細胞-細胞外基質(zhì)LN以及細胞-細胞間的黏附能力,而CD151-AAA194-196組細

4、胞的黏附能力明顯低于CD151組(P<0.05);CD151及其突變體基因能夠引起內(nèi)皮細胞F-actin重組;
　　3.CD151組p-FAK-925和p-Rac1/Cdc42的表達水平明顯高于其他三組,而CD151-AAA194-196組RhoA活性及p-MLC蛋白的水平明顯升高(P<0.05)。
　　結論：1.成功將CD151及突變體基因轉入細胞內(nèi),并證實CD151細胞外大環(huán)上QRD194-196特異性位點對CD151-